[發明專利]循環腫瘤細胞表面標志分子HER2的檢測方法

在審

• 申請號: 201811523965.3
• 申請日: 2018-12-13
• 公開（公告）號: CN109541214A
• 公開（公告）日: 2019-03-29
• 發明（設計）人: 錢軍;周麗
• 申請（專利權）人: 錢軍
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/532
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 楊軍

1.一種循環腫瘤細胞表面標志分子HER2的檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)將全血用紅細胞裂解液處理，分離出有核細胞，并用甲醛進行固定；

2)先通過腫瘤免疫熒光標志物細胞角蛋白抗體anti-CK進行陽性篩選，用Her2一抗孵育所有細胞，然后用標記有FITC熒光基團的Her2二抗孵育，再用細胞核熒光染料DAPI標記出所有細胞；

3)采用高通量多色成像分析，選擇CY5、FITC和DAPI的濾光片，觀察通道表面熒光顏色，即實現對循環腫瘤細胞表面標志分子Her2的檢測。

2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟2)的具體反應條件如下：

a.向細胞固定后的培養皿中加入含4-6％脫脂奶粉的PBS溶液，4℃避光孵育40-70min；

b.吸除脫脂奶粉PBS溶液后，沿壁加入PBST清洗若干次；

c.向封閉液中加入腫瘤免疫熒光標志物細胞角蛋白抗體anti-CK和Her2一抗，抗體來源為abcam公司，混合均勻后沿壁加入培養皿中，4℃避光孵育過夜；

d.吸除混合液，向封閉液中加入標記有FITC熒光基團的Her2二抗，抗體來源為abcam公司，混勻后沿壁加入培養皿中，4℃避光孵育40-70minh；

e.吸除抗體，用PBST清洗若干次，加入DAPI，常溫避光孵育20-40min。

3.如權利要求2所述的方法，其特征在于：條件b中，PBST中含0.02wt％Tween-20的PBS。

4.如權利要求1所述的方法，其特征在于：步驟3)中，觀察通道表面熒光顏色，顯藍色的則DAPI+，不顯藍色則DAPI-，顯綠色則Her2+，不顯綠色則Her2-，顯紅色則CK+，不顯紅色則CK-；根據熒光顯色，將DAPI+且CK+的點認為是循環腫瘤細胞CTC，若該循環腫瘤細胞CTC上存在Her2+，那么該循環腫瘤細胞CTC為Her2+CTC。