[發(fā)明專利]一種基于可降解性納米酶的抗壞血酸比色檢測法

有效

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• 申請日: 2018-12-12
• 公開（公告）號: CN109596606B
• 公開（公告）日: 2020-09-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 孫大文;黃倫杰;蒲洪彬;韋慶益
• 申請（專利權(quán)）人: 華南理工大學(xué)
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78
• 代理公司: 廣州市華學(xué)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44245
• 代理人: 向玉芳

本發(fā)明公開了一種基于可降解性納米酶的抗壞血酸比色檢測法，基于羥基氧化錳納米線模擬酶催化和抗壞血酸對該酶的降解作用原理，包括以下步驟：可降解性納米酶試紙片制備，檢測卡制備，樣品滴加操作，樣品槽和對照槽中檢測卡的顏色提取，校正樣品槽中檢測卡顏色評價值，顏色校正評價值與抗壞血酸擬合模型，含有抗壞血酸濃度的待測樣品檢測。本發(fā)明利用可降解性納米酶構(gòu)建了用于抗壞血酸測定的視覺檢測卡，并可通過更換試紙片重復(fù)利用，實現(xiàn)抗壞血酸的快速測定。相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明對檢測設(shè)備要求低，只需檢測卡和智能手機(jī)即可完成檢測過程。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及食品檢測領(lǐng)域，特別涉及一種基于可降解性納米酶的抗壞血酸比色檢測法。

背景技術(shù)

抗壞血酸(AA)，也被稱為維生素C，存在于各種水果、蔬菜和動物飼料中，是維持人體正常生理功能最重要的維生素之一。抗壞血酸參與許多生物作用過程，如對人體內(nèi)DNA和蛋白質(zhì)的抗氧化、自由基的清除等起著關(guān)鍵作用。各種研究表明，抗壞血酸表達(dá)水平與許多疾病密切相關(guān)，如壞血病，肝病，動脈硬化，心血管疾病，癌癥等。然而，作為必需的營養(yǎng)素，抗壞血酸不能通過人體自身的生理系統(tǒng)產(chǎn)生，它必須通過外源攝取得以補(bǔ)充以維持人體正常機(jī)能。因此，抗壞血酸經(jīng)常作為抗氧化劑和營養(yǎng)補(bǔ)充劑添加到工業(yè)食品中。鑒于此，構(gòu)建用于分析食品中抗壞血酸含量的即時檢測方法或設(shè)備具有重要意義。

迄今為止，已經(jīng)開發(fā)了許多分析技術(shù)和方法，例如色譜法(HPLC)，電化學(xué)法、熒光光譜法及比色檢測法等。但是，大多數(shù)這些方法都存在障礙，例如設(shè)備昂貴，操作技術(shù)要求高，樣品預(yù)處理復(fù)雜或檢測靈敏度低等。

納米酶，是一類具有類酶催化活性的納米材料。作為一種新穎的天然酶模擬物，納米酶具有優(yōu)異的催化活性、穩(wěn)定性、低成本和易制取等特點，從而被用于多種高性能比色檢測方法中。雖然有部分方法利用納米酶進(jìn)行抗壞血酸比色檢測，但它們絕大部分的檢測原理是通過抗壞血酸還原納米酶催化的產(chǎn)物實現(xiàn)檢測目的，靈敏度和選擇性較差；且都是溶液檢測體系，仍擺脫不了不穩(wěn)定、重現(xiàn)性差、不便攜等缺陷，無法滿足對抗壞血酸現(xiàn)場即時檢測的需求。

發(fā)明內(nèi)容

為了克服現(xiàn)有方法的上述缺陷和不足，本發(fā)明的主要目的在于提供一種基于可降解性納米酶的抗壞血酸(AA)比色檢測法。檢測過程在試紙片及檢測卡上完成，可實現(xiàn)對食品樣品中抗壞血酸的高靈敏、穩(wěn)定、快速且便攜式檢測。為達(dá)到上述技術(shù)效果，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為：

本發(fā)明提供了一種基于可降解性納米酶的抗壞血酸(AA)比色檢測法。本方法首先將羥基氧化錳(MnOOH)納米材料溶液均勻滲透在試紙片上，隨后將其真空干燥6小時并嵌入檢測卡基板的槽孔中，組裝得到檢測卡。然后，將抗壞血酸(AA)滴加到試紙上并孵育5分鐘，使得MnOOH納米線充分分解，最后滴加3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)在室溫孵育15分鐘，產(chǎn)生隨抗壞血酸濃度變化的顏色信號，結(jié)合建立的顏色評價值與抗壞血酸擬合模型，可實現(xiàn)對抗壞血酸的快速檢測。

一種基于可降解性納米酶的抗壞血酸(AA)比色檢測法，包括以下步驟：

S1采用吸水紙制備圓形試紙片，并將其充分浸潤在羥基氧化錳(MnOOH)納米線水溶液中，然后取出試紙片，真空烘干后的試紙片置于常溫密封容器內(nèi)保存，制得可降解性納米酶試紙片；

S2在基板上制備樣品槽和1個空白對照槽，將S1制得的可降解性納米酶試紙片嵌入到基板的樣品槽和對照槽中，得到檢測卡；

S3將不同濃度梯度的抗壞血酸標(biāo)準(zhǔn)液分別滴加到S2制得的檢測卡的樣品槽中，滴加完畢后停留使得MnOOH納米線充分分解，然后將醋酸鹽緩沖液稀釋的3,3',5,5'-四甲基聯(lián)苯胺(TMB)溶液滴加到樣品槽和對照槽的檢測卡上，在室溫下孵育；

S4采集樣品槽和空白對照槽的顏色，提取樣品槽的紅色通道值(R)、綠色通道值(G)和藍(lán)色通道值(B)，空白對照槽的紅色通道值(R₀)、綠色通道值(G₀)和藍(lán)色通道值(B₀)；