[發明專利]一種基于可降解性納米酶的抗壞血酸比色檢測法

有效

• 申請號: 201811519080.6
• 申請日: 2018-12-12
• 公開（公告）號: CN109596606B
• 公開（公告）日: 2020-09-22
• 發明（設計）人: 孫大文;黃倫杰;蒲洪彬;韋慶益
• 申請（專利權）人: 華南理工大學
• 主分類號: G01N21/78
• 分類號: G01N21/78
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 向玉芳

1.一種基于可降解性納米酶的抗壞血酸比色檢測法，其特征在于，包括以下步驟：

S1采用吸水紙制備圓形試紙片，并將其充分浸潤在MnOOH納米線水溶液中，然后取出試紙片，真空烘干后的試紙片置于常溫密封容器內保存，制得可降解性納米酶試紙片；

S2在基板上制備樣品槽和1個空白對照槽，將S1制得的可降解性納米酶試紙片嵌入到基板的樣品槽和對照槽中，得到檢測卡；

S3將不同濃度梯度的抗壞血酸標準液分別滴加到S2制得的檢測卡的樣品槽中，滴加完畢后停留使得MnOOH納米線充分分解，然后將醋酸鹽緩沖液稀釋的3,3',5,5'-四甲基聯苯胺溶液滴加到樣品槽和對照槽的檢測卡上，在室溫下孵育；

S4采集樣品槽和空白對照槽的顏色，提取樣品槽的紅色通道值R、綠色通道值G和藍色通道值B，空白對照槽的紅色通道值R₀、綠色通道值G₀和藍色通道值B₀；

S5樣品槽未校正的顏色評價值為2×R/(G+B)，空白對照槽的顏色評價值為2×R₀/(G₀+B₀)，樣品槽的校正評價值為y₁＝(2×R/(G+B))-(2×R₀/(G₀+B₀))；

S6以不同濃度抗壞血酸標準液濃度μM為x，其對應樣品槽顏色的校正評價值為y₁，進行線性擬合，得到抗壞血酸濃度與檢測卡顏色校正評價值的線性回歸方程y；

S7另取新的步驟S2制得的檢測卡，將待測樣品滴加在檢測卡的任意一個樣品槽上，滴加完畢后停留使得MnOOH納米線充分分解，然后將醋酸鹽緩沖液稀釋的3,3',5,5'-四甲基聯苯胺(TMB)溶液滴加到樣品槽上，在室溫下孵育，此步驟的操作跟S3相同；然后采集樣品槽和空白對照槽的3種顏色通道的值，得到待測樣品的顏色校正評價值y’，帶入S6中的線性回歸方程，則得到待測樣品中抗壞血酸的濃度x’。

2.根據權利要求1所述基于可降解性納米酶的抗壞血酸比色檢測法，其特征在于，步驟S1所述MnOOH納米線水溶液的濃度不小于10μg/mL。

3.根據權利要求2所述基于可降解性納米酶的抗壞血酸比色檢測法，其特征在于，步驟S1所述圓形試紙片的直徑為0.6cm；步驟S1所述浸潤的時間為10～20min；所述烘干的時間為3～9h。

4.根據權利要求1或2所述基于可降解性納米酶的抗壞血酸比色檢測法，其特征在于，步驟S2所述樣品槽的個數不少于8；所述樣品槽為直徑不小于7mm的圓槽；所述空白對照槽為直徑不小于8mm的圓槽；所述基板的長寬高為50*50*2.5mm，所述基板為樹脂材質；所述空白對照槽的圓心位于基板的中心，所述樣品槽均勻分布于以基板中心為圓心的圓上。

5.根據權利要求1或2所述基于可降解性納米酶的抗壞血酸比色檢測法，其特征在于，步驟S3所述抗壞血酸標準液的濃度分別為1μM，5μM，10μM，20μM，30μM，40μM，50μM和60μM。

6.根據權利要求1所述基于可降解性納米酶的抗壞血酸比色檢測法，其特征在于，步驟S3所述停留的時間為3～8min；所述孵育的時間為10～20min；步驟S3所述醋酸鹽緩沖液稀釋的3,3',5,5'-四甲基聯苯胺溶液的濃度為0.5～1mM；所述醋酸鹽緩沖液的pH為3.5～4.5。

7.根據權利要求1或2所述基于可降解性納米酶的抗壞血酸比色檢測法，其特征在于，步驟S3所述抗壞血酸標準液在樣品槽中的滴加量為0.1～0.5μL/mm²；所述醋酸鹽緩沖液稀釋的3,3',5,5'-四甲基聯苯胺溶液在樣品槽和對照槽的檢測卡的加入量分別為0.1～0.5μL/mm²和0.1～0.5μL/mm²。