[發明專利]CMPF均相酶免疫檢測試劑盒、制備方法及檢測方法

有效

• 申請號: 201811518946.1
• 申請日: 2018-12-12
• 公開（公告）號: CN109765360B
• 公開（公告）日: 2020-01-21
• 發明（設計）人: 朱永良;王軼雄;程小龍
• 申請（專利權）人: 杭州博譜醫藥科技有限公司
• 主分類號: G01N33/535
• 分類號: G01N33/535
• 代理公司: 11411 北京聯瑞聯豐知識產權代理事務所(普通合伙)
• 代理人: 陳劍聰

本發明公開了一種CMPF均相酶免疫檢測試劑盒、制備方法及檢測方法，試劑盒的CMPF抗體的免疫原由CMPF與蛋白質或多聚賴氨酸偶聯物作為免疫原進行免疫獲得。分別利用CMPF支鏈末端的?COOH與蛋白質或多聚賴氨酸分子上的?NH2進行偶聯；接著利用這些偶聯物免疫物作為免疫原進行免疫小鼠或家兔，最后獲得特異性的抗CMPF的單克隆或多克隆抗體；并基于該抗CMPF的單克隆或多克隆抗體建立CMPF含量檢測方法；該檢測方法可在生化分析儀等大型自動化儀器上進行大樣本自動化檢測分析。檢測方法具有檢測靈敏度高，特異性強，檢測重復性高和穩定性好等優點，本發明方法檢測靈敏度0.5μg/L。

技術領域

本發明涉及臨床生化檢測技術領域，具體為一種CMPF均相酶免疫檢測試劑盒、制備方法及檢測方法,更具體為一種CMPF均相酶免疫檢測試劑盒、CMPF均相酶免疫檢測試劑盒的制備方法，以及利用該試劑盒實現的呋喃脂肪酸代謝產物3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸(3-carboxy-4-methyl--propyl-2-furanpropanoic acid，簡稱CMPF)含量的檢測方法。

背景技術

蛋白結合類毒素是尿毒癥毒素中重要的一類物質，其本身均為小分子物質(分子量＜500Da)，人體內該類物質易與人血清蛋白(human serumalbumin，HAS)結合，形成中大分子，馬尿酸(hippuric acid，HA)、硫酸吲哚酚(indoxyl sulfate，IS)、硫酸對甲酚(p-cresyl sulfate，PCS)及3-羧基-4--甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸(3-carboxy-4-methyl-5-propyl-2-furanpropionic acid，CMPF)為蛋白結合類毒素的典型代表。蛋白結合類毒素的蛋白結合率是研究蛋白結合類毒素代謝學的重要參數之一，與該類毒素在體內分布、代謝、發揮毒性及排泄密切相關，對臨床治療有重要意義。

除此之外，最近的研究發現，CMPF作為特定的呋喃脂肪酸代謝產物，其在妊娠糖尿病和2型糖尿病患者的血液中顯著增加。小鼠實驗表明，CMPF含量濃度的增加，可誘導葡萄糖耐受不良(glucose intolerance)，損壞葡萄糖刺激的胰島素分泌，并降低葡萄糖的利用，從而導致胰腺中β細胞的胰島素分泌下降，導致糖尿病的進一步發展。因此，CMPF也可用于糖尿病監控的生化指標。

發明內容

有鑒于此，本發明目的是提供一種CMPF均相酶免疫檢測試劑盒、制備方法及檢測方法,具體為一種CMPF均相酶免疫檢測試劑盒、CMPF均相酶免疫檢測試劑盒的制備方法，以及利用該試劑盒實現的外周血(包括血清、血漿和全血)等體液中呋喃脂肪酸代謝產物3-羧基-4-甲基-5-丙基-2-呋喃丙酸(3-carboxy-4-methyl--propyl-2-furanpropanoic acid，簡稱CMPF)含量的檢測方法，檢測方法具有檢測靈敏度高，特異性強，檢測重復性高和穩定性好等優點。

所采用的技術方案為：

本發明的第一方面，一種CMPF均相酶免疫檢測試劑盒，包括如下試劑：

試劑R1,其含有CMPF抗體、NAD輔酶和G-6-P-Na2；

試劑R2，其含有G6PDH-CMPF偶聯物和載體；

標準品溶液，其由CMPF與校準品稀釋液梯度稀釋而成，所述校準品稀釋液含有緩沖液和載體。

進一步地，所述CMPF抗體為抗CMPF的特異性鼠源性單克隆IgG型抗體或抗CMPF的兔源性多克隆IgG抗體，所述特異性鼠源性單克隆IgG型抗體包括IgG1和/或IgG2a和/或IgG2b和/或IgG3和/或IgG4型抗體；所述兔源性多克隆IgG抗體包含F(ab')2特異性抗體片段。

進一步地，所述載體為載體蛋白質和/或多聚賴氨酸，所述載體蛋白質為BSA、OVA、KLH中的一種或多種。

進一步地，所述緩沖液為磷酸鹽緩沖液或Tris-HCl緩沖液。