[發(fā)明專利]一種多級(jí)pH敏感納米載藥系統(tǒng)

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811518174.1
• 申請(qǐng)日: 2018-12-12
• 公開（公告）號(hào): CN109394691A
• 公開（公告）日: 2019-03-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 梁燕;霍青青;杜琛;孫雅林;孫勇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 青島大學(xué)
• 主分類號(hào): A61K9/107
• 分類號(hào): A61K9/107;A61K31/704;A61K41/00;A61K47/34;A61P35/00;G01N21/64
• 代理公司: 北京匯捷知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11531
• 代理人: 李宏偉

1.一種多級(jí)pH敏感納米載藥系統(tǒng)，其特征在于：

(1)聚合物cRGD-PL(DMA)-PH-PCL-Por的合成及表征；

(2)聚合物納米膠束的制備；

(3)聚合物納米膠束與表比柔星間的相互作用；

(4)聚合物納米載藥膠束的體外釋放；

(5)基于FRET的示蹤；

(6)體內(nèi)外對(duì)腫瘤組織地抑制作用：

①聚合物納米載藥膠束對(duì)體外腫瘤細(xì)胞地抑制作用；

②聚合物納米載藥膠束的動(dòng)物體內(nèi)抗腫瘤效果。

2.按照權(quán)利要求1所述一種多級(jí)pH敏感納米載藥系統(tǒng)，其特征在于：所述步驟(1)包括

①PCL-Por的合成

光敏劑5-(4-羧苯基)-10,15,2-三苯基卟啉與乙醇胺發(fā)生酰胺化反應(yīng)，將卟啉衍生物的端基由羧基變?yōu)榱u基；通過陰離子聚合，端基為羥基的卟啉作為引發(fā)劑，辛酸亞錫作為催化劑，引發(fā)己內(nèi)酯開環(huán)聚合，最終得到端基修飾卟啉的聚己內(nèi)酯疏水鏈段PCL-Por，粗產(chǎn)品提純后，通過液相核磁的方法計(jì)算出所聚合的疏水鏈段的相對(duì)分子質(zhì)量及確定分子結(jié)構(gòu)的正確性。

②PH-PCL-Por的合成

首先將N^a-CBZ-N^im-DNP-_L-histidine重結(jié)晶純化處理，而后通過其與三光氣反應(yīng)生成組氨酸NCA，將得到的產(chǎn)物PCL-Por與Boc保護(hù)的甘氨酸反應(yīng)，使PCL-Por端基變?yōu)榘被蛔詈笸ㄟ^端基為氨基的PCL-Por作為引發(fā)劑，引發(fā)組氨酸NCA開環(huán)聚合為聚組氨酸，最終得到PH-PCL-Por，粗產(chǎn)品提純后，通過液相核磁的方法計(jì)算出所聚合的疏水鏈段的相對(duì)分子質(zhì)量及確定分子結(jié)構(gòu)的正確性。

③PL-PH-PCL-Por的合成

PH-PCL-Por與ε-PL發(fā)生酰胺化反應(yīng)，得到PL-PH-PCL-Por，而后與適量的三氟乙酸反應(yīng)，脫去Boc,粗產(chǎn)品提純后，通過液相核磁的方法確定分子結(jié)構(gòu)的正確性。

④cRGD-PL-PH-PCL-Por的合成

PL-PH-PCL-Por與3-馬來酰亞胺基丙酸反應(yīng)，而后與c(RGDfC)SH反應(yīng)，將cRGD修飾到親水鏈段上，得到cRGD-PL-PH-PCL-Por，提純，通過液相核磁確定得到兩親性聚合物分子的結(jié)構(gòu)。

⑤cRGD-PL(DMA)-PH-PCL-Por的合成

脫去cRGD-PL-PH-PCL-Por中PL側(cè)鏈上的Boc保護(hù)，暴露出氨基，與DMA反應(yīng)，得到粗產(chǎn)物，然后使其與巰基乙醇反應(yīng)，得到產(chǎn)物，提純后得到cRGD-PL(DMA)-PH-PCL-Por，通過液相核磁和凝膠色譜法共同確定得到兩親性聚合物分子的分子量及結(jié)構(gòu)的正確性。

3.按照權(quán)利要求1所述一種多級(jí)pH敏感納米載藥系統(tǒng)，其特征在于：所述步驟(2)取兩親性聚合物cRGD-PL(DMA)-PH-PCL-Por溶于DMSO溶液中，室溫水浴超聲后將其分散于超純水中，其溶液體積比例小于1：10，置于透析袋中超純水透析以除去DMSO得空白膠束，表柔比星和兩親性聚合物分別溶于DMSO溶液，室溫水浴超聲，得兩者混合的DMSO溶液，于攪拌條件下將混合溶液逐滴加入到超純水中，繼續(xù)攪拌一段時(shí)間后，于4℃置于透析袋中超純水透析以除去DMSO及游離藥物，即得到載表柔比星的納米膠束，通過透射電鏡和激光粒度儀表征聚合物膠束的粒徑、形貌特點(diǎn)及Zeta電位，并且觀察研究不同pH值下，對(duì)聚合物膠束的粒徑及表面所帶電荷的影響，將聚合物載藥膠束溶液凍干，將一定量的聚合物載藥膠束粉末溶于DMSO溶液中，通過高效液相色譜測試聚合物載藥膠束的載藥量及包封率。

4.按照權(quán)利要求1所述一種多級(jí)pH敏感納米載藥系統(tǒng)，其特征在于：所述步驟(3)將一定量的聚合物納米載藥膠束溶于水中，震蕩使其完全溶解，通過熒光分光光度計(jì)及紫外分光光度計(jì)觀察其圖譜變化，峰高低及位移的移動(dòng)，研究聚合物納米膠束作為藥物載體與所負(fù)載藥物表比柔星間的相互作用力。