[發明專利]一種甜菜耐堿脅迫的長鏈非編碼RNA基因及其制備方法與應用

在審

• 申請號: 201811512135.0
• 申請日: 2018-12-11
• 公開（公告）號: CN111304197A
• 公開（公告）日: 2020-06-19
• 發明（設計）人: 鄒春雷;李彩鳳;劉磊;王彬;陳婧婷;劉新宇;張樹友;趙猛;王玉波;劉丹;武沛然;楊芳芳
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/10;C12N15/82;A01H5/00;A01H6/82
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 鄧宇

一種甜菜耐堿脅迫的長鏈非編碼RNA基因及其制備方法與應用，屬于植物生物技術領域，為了解析甜菜耐鹽堿的分子機理，本發明提供了一種甜菜耐堿脅迫的長鏈非編碼RNA基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，通過轉基因煙草驗證了該基因參與植物耐鹽堿脅迫調控體系，為進一步解析甜菜耐鹽堿分子機理提供了一個基因來源，豐富甜菜耐鹽堿理論體系奠定基礎。

技術領域

本發明屬于植物生物技術領域，具體涉及一種甜菜耐堿脅迫的長鏈非編碼RNA基因及其制備方法與應用。

背景技術

高通量測序技術的發展揭示基因組中90％以上的基因可轉錄出大量的非編碼RNA。根據長度大小，非編碼RNA可分為miRNA(micro-RNA)、siRNA(small interfering RNA)和lncRNA(長鏈非編碼RNA)。lncRNA的長度在200nt以上，編碼蛋白質的能力較弱，是數量最多的一類非編碼RNA。

有關lncRNA的研究在動物領域取得了重大的進展，然而對植物lncRNA的功能和調控網絡的研究仍處于起步階段。對于藜科植物甜菜的lncRNA的研究鮮有報道。甜菜基因組測序的完成使得甜菜成為研究植物響應逆境脅迫的一種良好的模式植物。然而關于甜菜適應鹽堿脅迫的轉錄組學機制以及甜菜耐鹽堿相關基因的轉化還鮮有報道，尤其是有關甜菜適應鹽堿脅迫的非編碼RNA的研究。

發明內容

為了解析甜菜耐鹽堿的分子機理，本發明提供了一種甜菜耐堿脅迫的長鏈非編碼RNA基因，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

本發明還提供了含有權利要求1所述的甜菜耐堿脅迫的長鏈非編碼RNA基因的重組載體或重組菌。

本發明還提供了上述甜菜耐堿脅迫的長鏈非編碼RNA基因的制備方法，包括如下步驟：

1)將甜菜進行堿脅迫處理；

2)提取堿脅迫處理后的甜菜總RNA；

3)反轉錄制備cDNA；

4)以cDNA為模板，利用如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示的引物序列PCR擴增制備獲得甜菜耐堿脅迫的長鏈非編碼RNA基因lncRNA LNC_008366。

進一步地限定，步驟(1)所述甜菜為甜菜品種KWS0143。

進一步地限定，步驟(1)所述堿脅迫處理是指分別將四周齡的甜菜經75mmol·L^-1鹽堿液處理1、3、5和7天，所述鹽堿液為NaHCO₃與Na₂CO₃的混合溶液，脅迫處理后，將不同處理天數的甜菜樣品混合，用于步驟2)提取總RNA。

本發明還提供了所述甜菜耐堿脅迫的長鏈非編碼RNA基因在提高植物鹽堿脅迫抗性中的應用。

進一步地限定，所述應用包括如下步驟：

1)構建含有如SEQ ID NO：1所示的甜菜耐堿脅迫的長鏈非編碼RNA基因的植物表達重組載體；

2)將植物表達重組載體轉化宿主植物，經篩選獲得具有鹽堿脅迫抗性的轉基因植株。

更進一步地限定，步驟1)所述構建植物表達重組載體所用的載體為pCBM。

更進一步地限定，步驟2)所述植物表達重組載體通過農桿菌介導法轉化宿主植物。

更進一步地限定，所述農桿菌為農桿菌EHA105；所述宿主植物為煙草。

有益效果