[發明專利]一種甜菜耐堿脅迫的長鏈非編碼RNA基因及其制備方法與應用

在審

• 申請號: 201811512135.0
• 申請日: 2018-12-11
• 公開（公告）號: CN111304197A
• 公開（公告）日: 2020-06-19
• 發明（設計）人: 鄒春雷;李彩鳳;劉磊;王彬;陳婧婷;劉新宇;張樹友;趙猛;王玉波;劉丹;武沛然;楊芳芳
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/10;C12N15/82;A01H5/00;A01H6/82
• 代理公司: 哈爾濱市陽光惠遠知識產權代理有限公司 23211
• 代理人: 鄧宇

1.一種甜菜耐堿脅迫的長鏈非編碼RNA基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示。

2.含有權利要求1所述的甜菜耐堿脅迫的長鏈非編碼RNA基因的重組載體或重組菌。

3.權利要求1所述的甜菜耐堿脅迫的長鏈非編碼RNA基因的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：

1)將甜菜進行堿脅迫處理；

2)提取堿脅迫處理后的甜菜總RNA；

3)反轉錄制備cDNA；

4)以cDNA為模板，利用如SEQ ID NO：2和SEQ ID NO：3所示的引物序列PCR擴增制備獲得甜菜耐堿脅迫的長鏈非編碼RNA基因lncRNA LNC_008366。

4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)所述甜菜為甜菜品種KWS0143。

5.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，步驟(1)所述堿脅迫處理是指分別將四周齡的甜菜經75mmol·L^-1鹽堿液處理1、3、5和7天，所述鹽堿液為NaHCO₃與Na₂CO₃的混合溶液，脅迫處理后，將不同處理天數的甜菜樣品混合，用于步驟2)提取總RNA。

6.權利要求1所述甜菜耐堿脅迫的長鏈非編碼RNA基因在提高植物鹽堿脅迫抗性中的應用。

7.根據權利要求6所述的應用，其特征在于，包括如下步驟：

1)構建含有權利要求1所述甜菜耐堿脅迫的長鏈非編碼RNA基因的植物表達重組載體；

2)將植物表達重組載體轉化宿主植物，經篩選獲得具有鹽堿脅迫抗性的轉基因植株。

8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，步驟1)所述構建植物表達重組載體所用的載體為pCBM。

9.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，步驟2)所述植物表達重組載體通過農桿菌介導法轉化宿主植物。

10.根據權利要求9所述的應用，其特征在于，所述農桿菌為農桿菌EHA105；所述宿主植物為煙草。