[發明專利]一種鑒定甜瓜性型InDel分子標記及其引物和應用在審
| 申請號： | 201811511522.2 | 申請日： | 2018-12-11 |
| 公開（公告）號： | CN109439790A | 公開（公告）日： | 2019-03-08 |
| 發明（設計）人： | 王吉明;李娜;尚建立;周丹;馬雙武 | 申請（專利權）人： | 中國農業科學院鄭州果樹研究所 |
| 主分類號： | C12Q1/6895 | 分類號： | C12Q1/6895;C12N15/11 |
| 代理公司： | 青島致嘉知識產權代理事務所(普通合伙) 37236 | 代理人： | 王增全 |
| 地址： | 450000 河南*** | 國省代碼： | 河南;41 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 甜瓜 核苷酸序列 堿基 引物 分子標記輔助育種 分子檢測技術 標記技術 分子育種 技術支持 片段缺失 引物擴增 種鑒定 染色體 酶切 應用 | ||
1.一種鑒定甜瓜性型的InDel分子標記，其特征在于，所述InDel分子標記InDel_msPr100位于甜瓜第2號染色體上，其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，在SEQ ID NO.1所示序列自5’起第28堿基至第40堿基之間的GACAAATTTGAAC片段缺失，獲得核苷酸序列如SEQID NO.2所示。
2.用于擴增權利要求1所述的InDel分子標記InDel_msPr100的引物對。
3.根據權利要求2所述的引物對，其特征在于，
上游引物F1:5’-AATGAAAATTTTGGTTTAATGGGA-3’，
下游引物R1:5’-AACCTCTCTCAACTTTGTGCTCAT-3’。
4.權利要求1所述的鑒定甜瓜性型的InDel分子標記InDel_msPr100在甜瓜性型分子標記輔助育種中的應用。
5.權利要求2或3所述的引物對在甜瓜性型分子標記輔助育種中的應用。
6.一種甜瓜性型基因型的鑒定方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)采用CTAB法提取甜瓜葉片DNA；
(2)PCR擴增：利用權利要求3所述的引物對，對待測樣品利用如下擴增體系進行PCR擴增：甜瓜葉片總DNA 1μL、權利要求3所述的上游引物F1 1μL、權利要求3所述的下游引物R11μL、2×Power Taq PCR MasterMix 12.5μL、ddH2O 9.5μL；
擴增程序為：94℃、5min；94℃、20s，55℃、1min，72℃、30s，共35個循環；72℃、5min；
(3)對PCR產物進行8％聚丙烯酰胺凝膠電泳，顯影、染色和帶型判讀，如果出現127bp大小的片段，或包含序列如SEQ ID NO.1所示的片段，則判定待測甜瓜為單性花株；如果僅出現114bp大小的單一片段，或序列如SEQ ID NO.2所示的片段，則判定待測甜瓜為兩性花株。
7.權利要求6所述的甜瓜性型的鑒定方法在甜瓜性型分子標記輔助育種中的應用。
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