[發明專利]一種環狀RNA hsa-circ-0044513及其特異性擴增引物和應用

在審

• 申請號: 201811508551.3
• 申請日: 2018-12-11
• 公開（公告）號: CN109402126A
• 公開（公告）日: 2019-03-01
• 發明（設計）人: 王立斌;張旭
• 申請（專利權）人: 寧夏醫科大學總醫院
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/11;C12Q1/6886;C12Q1/6851
• 代理公司: 北京弘權知識產權代理事務所(普通合伙) 11363
• 代理人: 逯長明;許偉群

本發明公開了一種環狀RNA hsa?circ?0044513及其特異性擴增引物和應用，其中，所述環狀RNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其在乳腺癌組織細胞以及患有乳腺癌患者的血液中高表達，可以作為篩查乳腺癌的分子標志物；本發明還提供一種用于擴增所述環狀RNA的特異性擴增引物，所述特異性擴增引物包括上游引物和下游引物，其中，所述上游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示，所述下游引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示；本發明還公開了所述特異性擴增引物在制備用于乳腺癌篩查的試劑盒中的應用及包括所述特異性擴增引物的試劑盒。

技術領域

本發明屬于腫瘤分子生物學領域，尤其涉及一種用于乳腺癌診斷的環狀RNA，用于所述環狀RNA的特異性擴增引物及應用。

背景技術

乳腺癌是一種常見的女性高危惡性腫瘤，嚴重影響人們的生活質量。近年來，全世界的女性癌癥患者中大約有22.9％為乳腺癌患者，新發現的乳腺癌患者中，中國患者占12.2％。盡管在藥物敏感性和外科技術上已有巨大的突破，乳腺癌的復發和轉移仍頻繁地發生，成為晚期乳腺癌患者死亡的主要原因。早期診斷、早期治療能夠大大減少乳腺癌惡化的進一步發生，隨著分子水平的發展以及對乳腺癌發生、發展、治療相關機制的進一步研究，對靶向診斷和靶向治療分子標志物的篩選和研究成為乳腺癌研究最受關注的領域之一。

環狀RNA(Circular RNA，circRNA)是一類不具有5'末端帽子和3'末端poly(A)尾巴、并以共價鍵形成環形結構的非編碼RNA分子，主要由前體RNA(pre-mRNA)通過可變剪切加工產生。circRNA大多數定位于細胞質中，少數定位于細胞核內，大多數由外顯子形成。circRNA不易被核酸外切酶降解，與線性RNA相比能更穩定地存在于生物體內，其在不同的物種中具有保守性，同時在不同組織及發育階段具有表達特異性，大多數circRNA在不同的物種間含量豐富且都具有組織特異性，在人體組織、唾液、血液和外泌體中都有穩定表達，這使得circRNA成為腫瘤患者診斷、治療和預后追蹤的理想生物標志物。

近年來，關于circRNA與腫瘤之間的關系研究已有很多報道，已經明確circRNA具有調節腫瘤細胞增殖、凋亡、血管形成、代謝以及耐藥等功能。Zhang等通過對不同泌乳時期的兩組老鼠的乳腺組織進行circRNA芯片檢測，發現circRNA在不同泌乳期老鼠乳腺組織中的表達有很大差異，兩個時期檢測到circRNA種類大多數不同。因此，circRNA可能是乳腺癌精準診療的新靶點，發現和篩選乳腺癌相關的circRNA標志物，對早期防治乳腺癌具有重要的意義和價值。

發明內容

本申請的目的在于提供以下幾個方面：

第一方面，本申請提供一種環狀RNA，所述環狀RNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示，其中，起始兩個核苷酸與最末兩個核苷酸為成環結合位點。

所述環狀RNA在circ-RNA數據庫中的全稱為hsa-circ-0044513，簡稱circ-0044513，定位于人類17號染色體反義鏈73153480-73181929區域，由COL1A1基因外顯子(exon)44、45、46、47、48、49區剪切環化而成。

圖1為所述環狀RNA的基因結構圖，如圖1所示，所述環狀RNA circ-0044513的序列全長798bp，其中，CDS為蛋白質編碼區。

根據本申請的第二方面，提供本發明第一方面所述環狀RNA circ-0044513作為篩查乳腺癌的分子標志物的用途。

通過生物信息學預測，發明人發現環狀RNA circ-0044513的應答原件miR-21，該基因能夠通過PDCD4/MAPK/BCL-2信號通路影響腫瘤細胞凋亡。