[發(fā)明專利]一種測(cè)定C反應(yīng)蛋白的化學(xué)發(fā)光免疫方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811501173.6
• 申請(qǐng)日: 2018-12-10
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109298187B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-01-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李萍;宗晨;張多多;楊華
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)藥科大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N33/68
• 分類號(hào): G01N33/68;G01N21/76
• 代理公司: 43210 長(zhǎng)沙新裕知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 趙超

1.一種測(cè)定C反應(yīng)蛋白CRP的化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑，其特征在于，包括：CRP免疫傳感器芯片、探針A、探針B、CRP標(biāo)準(zhǔn)溶液、biotin-Ab2、鏈霉親和素以及化學(xué)發(fā)光底物；

其中：

所述CRP免疫傳感器芯片通過(guò)如下方法制備：在醛基片表面粘貼一層疏水、無(wú)光活性膜，構(gòu)建出若干個(gè)傳感池；取10μg/mL CRP的包被抗體Ab1 10μL滴加到傳感池中，4℃下溫育過(guò)夜，用沖洗緩沖液沖洗并干燥，實(shí)現(xiàn)將Ab1固定在醛基片表面，構(gòu)建出具有若干個(gè)檢測(cè)位點(diǎn)的CRP免疫傳感器芯片；

所述探針A通過(guò)如下方法合成：25μL 10μM DNA-A、25μL 10μM DNA-hemin、25μL 10μMbiotin-DNA緩慢加入1mL銀納米粒子溶液中，常溫下緩慢攪拌反應(yīng)18小時(shí)，其后，加入25μL10μM SH-A15攪拌2小時(shí)來(lái)封閉還有活性位點(diǎn)的銀納米粒子，122μL 0.01M PBS加入溶液反應(yīng)6h，然后21μL 2M NaCl加入溶液，3h后重復(fù)將21μL 2M NaCl加入溶液；12h后，26μL 2MNaCl加入溶液，3h后重復(fù)將26μL 2M NaCl加入溶液；48小時(shí)后，溶液在14℃、15000rpm下離心15min，將沉淀分散在1mL 0.2M PBS⁺；

所述探針B通過(guò)如下方法合成：25μL 10μM DNA-B、25μL 10μM DNA-hemin緩慢加入1mL銀納米粒子溶液中，常溫下緩慢攪拌反應(yīng)18小時(shí)，其余步驟同探針A的合成；

DNA-A序列為HS-AAAAAAAAAAAAAAACTGTGCATGCATTGTACG；

DNA-B序列為HS-AAAAAAAAAAAAAAACGTACAATGCATGCACAG；

DNA-hemin序列為HS-AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA-hemin；

SH-A15序列為HS-AAAAAAAAAAAAAAA；

biotin-DNA序列為HS-AAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA-biotin；

所述biotin-Ab2中的Ab2為CRP檢測(cè)抗體；

所述化學(xué)發(fā)光底物為luminol-p-iodophenol和H₂O₂。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑，其特征在于：所述銀納米粒子溶液的濃度為8-12nM，銀納米粒子平均粒徑為8-12nm。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑，其特征在于，所述銀納米粒子溶液制備方法為：10mL 1mM AgNO₃逐滴加入冰浴的30mL 2.0mM NaBH₄和2mL 34mM檸檬酸三鈉中常溫?cái)嚢璺磻?yīng)30min至溶液呈亮黃色，放入4℃冰箱冷藏待用。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化學(xué)發(fā)光免疫檢測(cè)試劑，其特征在于：構(gòu)建出48個(gè)傳感池，以4行×12列模式排列。