[發(fā)明專(zhuān)利]一種水產(chǎn)品中孔雀石綠檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811497007.3
• 申請(qǐng)日: 2018-12-07
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109507126B
• 公開(kāi)（公告）日: 2021-01-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 黃志勇;趙晨;林鄭忠;洪誠(chéng)毅
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 集美大學(xué)
• 主分類(lèi)號(hào): G01N21/31
• 分類(lèi)號(hào): G01N21/31;G01N21/33
• 代理公司: 北京久維律師事務(wù)所 11582
• 代理人: 邢江峰

本發(fā)明公開(kāi)了一種水產(chǎn)品中孔雀石綠檢測(cè)方法，它包括磁性分子印跡聚合物的制備和基于核酸適配體和四氧化三鐵模擬酶催化方法的建立等實(shí)驗(yàn)步驟。本發(fā)明首先用多巴胺聚合法制備孔雀石綠(MG)磁性分子印跡聚合物(MG?MMIPs)，利用MG?MMIPs對(duì)樣品中的微量MG進(jìn)行吸附，達(dá)到富集目標(biāo)物和去除復(fù)雜介質(zhì)的目的，再將富集的MG解吸后，利用核酸適配體和四氧化三鐵模擬酶催化的檢測(cè)法進(jìn)行檢測(cè)。該方法的靈敏度為5nmol L?1，最低檢出限達(dá)到3.6nmol L?1。對(duì)MG的兩種結(jié)構(gòu)類(lèi)似物(燦爛綠和結(jié)晶紫)以及其他抑菌藥(磺胺胍、磺胺、鹽酸土霉素和氯霉素)的特異性實(shí)驗(yàn)表明，該方法對(duì)MG檢測(cè)具有良好的選擇性。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及孔雀石綠的檢測(cè)方法，具體是一種水產(chǎn)品中孔雀石綠檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

孔雀石綠(Malachite green，MG)是一種有毒的三苯甲烷類(lèi)物質(zhì)，又稱為鹽基塊綠、堿性孔雀綠、孔雀綠、堿性綠、中國(guó)綠或苯胺綠，為具有金屬光澤的深綠色結(jié)晶狀固體。孔雀石綠也可用作殺菌劑，對(duì)于防止霉菌在魚(yú)卵中生長(zhǎng)以及真菌的二次污染有較好的效果。但是，孔雀石綠存在高毒、高殘留和高致癌、誘變的缺點(diǎn)。由于其價(jià)格低廉，而且殺菌效果顯著，且沒(méi)有合適的替代品，目前仍有不法商戶在使用。由于其添加量很少就可以達(dá)到良好的殺菌效果，給檢測(cè)水產(chǎn)品中的MG帶來(lái)一定的難度。因此，建立MG殘留的檢測(cè)方法十分迫切并且具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

目前MG的檢測(cè)方法主要有高效液相色譜法、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法以及酶聯(lián)免疫法。這幾種方法在測(cè)定和分析水產(chǎn)品中孔雀石綠的殘留都具有結(jié)果可靠、靈敏度高、選擇性高、重復(fù)性好的優(yōu)點(diǎn)。但是這些方法在樣品前處理過(guò)程都存在繁瑣、復(fù)雜、耗時(shí)等不足，而且設(shè)備昂貴，檢測(cè)成本高，不僅需要消耗大量的溶劑和時(shí)間，還容易造成二次污染，影響檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。酶聯(lián)免疫法則需要制備抗體，操作復(fù)雜，且易受pH值、溫度等環(huán)境條件的影響，檢測(cè)條件苛刻。因此，發(fā)展一種簡(jiǎn)單高效的MG檢測(cè)方法對(duì)控制水產(chǎn)品質(zhì)量安全具有重要意義。

磁性分子印跡聚合物具有構(gòu)效穩(wěn)定、富集效率高、特異性強(qiáng)和適用性廣等特點(diǎn)，能夠?qū)G起到富集的作用，提高了檢測(cè)的靈敏度，而基于核酸適配體和四氧化三鐵模擬酶催化的檢測(cè)法具有操作簡(jiǎn)單、快速、經(jīng)濟(jì)的特點(diǎn)。將二者結(jié)合起來(lái)，以合成的磁性分子印跡聚合物富集MG后用四氧化三鐵模擬酶催化檢測(cè)體系進(jìn)行檢測(cè)，不僅提高了MG檢測(cè)靈敏度，還提高了體系的選擇性。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供一種水產(chǎn)品中孔雀石綠檢測(cè)方法，以解決上述背景技術(shù)中提出的問(wèn)題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種水產(chǎn)品中孔雀石綠檢測(cè)方法，所述水產(chǎn)品中孔雀石綠為基于磁性分子印跡聚合物和核酸適配體的四氧化三鐵模擬酶催化而檢測(cè)的水產(chǎn)品孔雀石綠，具體步驟如下：

(1)Fe₃O₄的合成：稱取0.30～0.36g聚乙二醇，加入7～9mL超純水，超聲直至聚乙二醇完全溶解，稱取2.00～2.06g FeCl₃加入到聚乙二醇溶液中超聲溶解，再稱取1.4～1.6gFeCl₂加入到上述溶液中至完全溶解，立即加入0.4～0.6mL 0.1mol·L^-1稀鹽酸，通氮除氧12～18min，60℃水浴下邊攪拌邊迅速加入55～65mL氨水，調(diào)轉(zhuǎn)速至1500r·min^-1，反應(yīng)1h，用磁鐵進(jìn)行吸附，并用超純水洗脫4～6次，真空冷凍干燥后保存?zhèn)溆茫?/p>