[發明專利]一種水產品中孔雀石綠檢測方法

有效

• 申請號: 201811497007.3
• 申請日: 2018-12-07
• 公開（公告）號: CN109507126B
• 公開（公告）日: 2021-01-01
• 發明（設計）人: 黃志勇;趙晨;林鄭忠;洪誠毅
• 申請（專利權）人: 集美大學
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31;G01N21/33
• 代理公司: 北京久維律師事務所 11582
• 代理人: 邢江峰

1.一種水產品中孔雀石綠檢測方法，其特征在于：所述水產品中孔雀石綠為基于磁性分子印跡聚合物和核酸適配體的四氧化三鐵模擬酶催化而檢測的水產品孔雀石綠，具體步驟如下：

(1)Fe₃O₄的合成：稱取0.30～0.36g聚乙二醇，加入7～9mL超純水，超聲直至聚乙二醇完全溶解，稱取2.00～2.06g FeCl₃加入到聚乙二醇溶液中超聲溶解，再稱取1.4～1.6g FeCl₂加入到上述溶液中至完全溶解，立即加入0.4～0.6mL 0.1mol·L^-1稀鹽酸，通氮除氧12～18min，60℃水浴下邊攪拌邊迅速加入55～65mL氨水，調轉速至1500r·min^-1，反應1h，用磁鐵進行吸附，并用超純水洗脫4～6次，真空冷凍干燥后保存備用；

(2)MG磁性分子印跡聚合物的制備：稱取100～200mg Fe₃O₄加到30mL的pH值8.5的Tris-HCl緩沖液20mmol·L^-1中，再加入6mg MG和90mg鹽酸多巴胺混勻，即MG濃度為0.2g·L^-1，多巴胺濃度為3g·L^-1，在電動攪拌下反應4h，用磁鐵進行吸附，并用甲醇：乙酸為9:1(v/v)混合液洗脫至無MG模板洗出，再用甲醇洗至中性，最后用超純水洗去甲醇，烘干后備用；

(3)Fe₃O₄模擬酶催化劑的制備：稱取1.30～1.40g FeCl₃加到30～50mL乙二醇中攪拌溶解，再加入3.4～3.8g無水乙酸鈉和800～1000μg PEG-200攪拌30min后轉移到反應釜中，200℃下反應12h，冷卻至室溫后將反應物轉移出反應釜，用超純水和乙醇反復清洗，真空干燥備用；

(4)檢測：稱取10～20mg磁性分子印跡聚合物于10mL離心管中，加入3mL濃度為5～100nmol·L^-1的MG水溶液，吸附5min后用磁鐵分離，棄去上清液，加入1mL甲醇乙酸(9:1，v/v)混合液洗脫15min，重復3次，合并提取液，用氮氣吹干提取液，立即加入300μL醋酸鈉緩沖液200mmol·L^-1(pH 4.0)，充分溶解后備用，在0.5mL離心管中加入10μL Fe₃O₄模擬酶催化劑和30μL 2.5μmol·L^-1MG-DNA核酸適配體，充分震蕩混合30min后分別加入50μL一系列濃度的MG提取液，充分混合30min，最后加入80μL 1μmol·L^-13,3',5,5'-四甲基聯苯胺(TMB)溶液和80μL 1mol·L^-1H₂O₂溶液，震蕩10min后用磁鐵將Fe₃O₄模擬酶催化劑分離，上清液轉入酶標板中，用酶標儀讀取650nm處的吸光度值。