[發(fā)明專利]微波萃取-固相萃取前處理結(jié)合液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)同時檢測水產(chǎn)養(yǎng)殖底泥中15種抗生素的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201811496374.1 | 申請日： | 2018-12-07 |
| 公開（公告）號： | CN109342632A | 公開（公告）日： | 2019-02-15 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 胡雙慶;沈根祥;張洪昌;郭春霞;錢曉雍;李貞金;汪仙仙;王真 | 申請（專利權(quán)）人： | 上海市環(huán)境科學(xué)研究院 |
| 主分類號： | G01N30/88 | 分類號： | G01N30/88;G01N30/08 |
| 代理公司： | 上海精晟知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31253 | 代理人： | 馮子玲 |
| 地址： | 200030 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 抗生素 底泥 固相萃取 微波萃取 前處理 水產(chǎn)養(yǎng)殖 檢測 聯(lián)用技術(shù) 結(jié)合液 內(nèi)標(biāo)物 磷酸鹽緩沖溶液 預(yù)處理 青霉素G鉀鹽 液質(zhì)聯(lián)用儀 阿莫西林 底泥樣品 定量檢測 高回收率 高靈敏度 高穩(wěn)定性 甲氧芐啶 檢測結(jié)果 凈化目標(biāo) 諾氟沙星 優(yōu)化檢測 磺胺甲 四環(huán)素 提取液 一次性 喹乙醇 富集 乙腈 優(yōu)選 回收率 殘留 篩選 | ||
1.一種微波萃取-固相萃取前處理結(jié)合液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)同時檢測水產(chǎn)養(yǎng)殖底泥中15種抗生素的方法，其特征在于，包括以下步驟：
(1)抗生素的提取：微波萃取
稱取經(jīng)冷凍干燥、粉碎、過篩后的底泥樣品，加入指示回收率的內(nèi)標(biāo)物，再加入提取溶劑，經(jīng)微波萃取、過濾后收集提取液，用超純水稀釋，調(diào)節(jié)pH值；
所述的指示回收率的內(nèi)標(biāo)物為磺胺甲噁唑-13C6、諾氟沙星-D5、青霉素G鉀鹽-D5、四環(huán)素-D6、喹乙醇-D4、阿莫西林-13C6和甲氧芐啶-D3；
(2)富集凈化：固相萃取
依次用甲醇和等體積的超純水活化固相萃取柱，將經(jīng)步驟(1)處理過的樣品過柱，控制樣品過柱流速；富集完后，依次用超純水和低濃度的甲醇淋洗固相萃取柱，并真空干燥固相萃取柱；最后用甲醇洗脫固相萃取柱，經(jīng)氮吹儀吹干，獲得殘渣；將殘渣用一定濃度的有機溶劑溶解、定容、超聲、過濾后轉(zhuǎn)移至小瓶，待測；
(3)高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法測定水產(chǎn)養(yǎng)殖底泥中七類15種抗生素的含量
采用內(nèi)標(biāo)法，用高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀，定量檢測水產(chǎn)養(yǎng)殖底泥中七類15種抗生素；所述的15種抗生素包括磺胺類、喹諾酮類、四環(huán)素類、β-內(nèi)酰胺類、硝基呋喃類、甲氧芐啶、喹乙醇這七類抗生素；15種抗生素分別為磺胺嘧啶SD、磺胺甲基嘧啶SM1、磺胺二甲基嘧啶SM2、磺胺間二甲氧基嘧啶SDM、磺胺甲噁唑SMX、甲氧芐啶TMP、恩諾沙星ENR、環(huán)丙沙星CIP、諾氟沙星NOR、呋喃唑酮AOZ、金霉素CTC、土霉素OTC、鹽酸多西環(huán)素DOX、阿莫西林AMZ、喹乙醇OLA。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，微波萃取前分別加入100ng的磺胺甲噁唑-13C6、諾氟沙星-D5、青霉素G鉀鹽-D5、四環(huán)素-D6、喹乙醇-D4、阿莫西林-13C6和甲氧芐啶-D3這七種內(nèi)標(biāo)物指示回收率。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟(1)中，所述的提取溶劑，是乙腈:磷酸鹽緩沖液體積比為1:1的乙腈與磷酸鹽緩沖液的混合溶液；采用CEM MARS CLASSIC型微波萃取儀進(jìn)行萃取，提取底泥中的抗生素；底泥樣品過濾所用的篩網(wǎng)為孔徑0.25mm的篩網(wǎng)；微波萃取后過濾提取液所用的玻璃纖維濾膜孔徑為0.45μm、0.47μm或0.7μm；稀釋后的樣品pH值調(diào)至3-4。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，活化固相萃取柱所用的甲醇和超純水用量為5-10mL；淋洗固相萃取柱所用的超純水和低濃度甲醇水溶液各為5-10mL；真空干燥的時間在20-30min；洗脫固相萃取柱時的流速低于10mL/min。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，富集凈化所用的固相萃取柱為Waters公司Oasis HLB小柱，它是一種親水-親脂性聚合物填料柱，其吸附劑是由親脂性二乙烯苯和親水性N-乙烯基吡咯烷酮兩種單體按一定比例聚合成的大孔共聚物，是用于酸性、中性和堿性化合物的通用型吸附劑；樣品過柱流速不超過5mL/min；活化固相萃取柱的流速不超過5mL/min。
6.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，淋洗固相萃取柱所用的低濃度甲醇為體積濃度小于10％的甲醇-水溶液；殘渣用有機溶劑溶解、定容后，超聲5-10min；用針式濾器過濾至棕色進(jìn)樣小瓶；針式濾器選用孔徑小于0.22μm的聚四氟乙烯針式濾頭。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，溶解氮吹后殘留物質(zhì)的有機溶劑為甲醇或乙腈，或體積濃度為70-80％的甲醇-水溶液，或體積濃度為70-80％的乙腈-水溶液。
該專利技術(shù)資料僅供研究查看技術(shù)是否侵權(quán)等信息，商用須獲得專利權(quán)人授權(quán)。該專利全部權(quán)利屬于上海市環(huán)境科學(xué)研究院，未經(jīng)上海市環(huán)境科學(xué)研究院許可，擅自商用是侵權(quán)行為。如果您想購買此專利、獲得商業(yè)授權(quán)和技術(shù)合作，請聯(lián)系【客服】
本文鏈接：http://www.szxzyx.cn/pat/books/201811496374.1/1.html，轉(zhuǎn)載請聲明來源鉆瓜專利網(wǎng)。
