[發(fā)明專利]微波萃取-固相萃取前處理結(jié)合液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)同時(shí)檢測(cè)水產(chǎn)養(yǎng)殖底泥中15種抗生素的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811496374.1
• 申請(qǐng)日: 2018-12-07
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109342632A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-02-15
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 胡雙慶;沈根祥;張洪昌;郭春霞;錢(qián)曉雍;李貞金;汪仙仙;王真
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海市環(huán)境科學(xué)研究院
• 主分類號(hào): G01N30/88
• 分類號(hào): G01N30/88;G01N30/08
• 代理公司: 上海精晟知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31253
• 代理人: 馮子玲

本發(fā)明涉及一種微波萃取?固相萃取前處理結(jié)合液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)同時(shí)檢測(cè)水產(chǎn)養(yǎng)殖底泥中15種抗生素的方法。該方法為：(1)底泥樣品預(yù)處理，加入指示回收率的內(nèi)標(biāo)物磺胺甲噁唑?¹³C₆、諾氟沙星?D₅、青霉素G鉀鹽?D₅、四環(huán)素?D₆、喹乙醇?D₄、阿莫西林?¹³C₆和甲氧芐啶?D₃；加入乙腈:磷酸鹽緩沖溶液作提取液微波萃取；(2)固相萃取富集凈化目標(biāo)抗生素；(3)液質(zhì)聯(lián)用儀定量檢測(cè)底泥中七類15種抗生素。該方法通過(guò)優(yōu)選內(nèi)標(biāo)物，篩選合適的前處理方法，優(yōu)化檢測(cè)條件，可一次性同時(shí)檢測(cè)出水產(chǎn)養(yǎng)殖底泥中含八種新增抗生素的15種抗生素的殘留情況，具有高回收率、高靈敏度、高穩(wěn)定性、低檢測(cè)限、檢測(cè)結(jié)果更真實(shí)可靠等優(yōu)點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于有機(jī)污染物質(zhì)殘留檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種水產(chǎn)養(yǎng)殖底泥中微量抗生素的檢測(cè)方法，特別涉及一種微波萃取-固相萃取前處理結(jié)合液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)同時(shí)檢測(cè)水產(chǎn)養(yǎng)殖底泥中15種抗生素含量的方法。

技術(shù)背景

近年來(lái)，我國(guó)的水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展迅速，規(guī)?；c集約化成為養(yǎng)殖的趨勢(shì)，而水生動(dòng)物疾病發(fā)生的頻率也在提高。為了防治魚(yú)類疾病和加快魚(yú)類生長(zhǎng)、繁殖,水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)廣泛而大量地使用抗生素。抗生素主要通過(guò)添加到飼料和直接投入的方式應(yīng)用于水產(chǎn)養(yǎng)殖過(guò)程中，研究表明，僅有20％-30％的抗生素被水生動(dòng)物吸收，其它則以原形或者代謝物形式被排入環(huán)境。這些抗生素可通過(guò)范德華力、氫鍵、疏水分配作用等吸附在底泥上。底泥中大量的微生物經(jīng)抗生素誘導(dǎo)產(chǎn)生抗性基因，進(jìn)而產(chǎn)生耐藥性，從而導(dǎo)致一些能夠抵抗強(qiáng)力抗生素的病原菌出現(xiàn)。

底泥樣品中抗生素的含量較低，而且底泥樣品基質(zhì)復(fù)雜，干擾物多，這些干擾成分的存在對(duì)準(zhǔn)確高效地測(cè)定底泥中抗生素含量具有較大的挑戰(zhàn)。因此，建立一種有效的分離富集方法對(duì)準(zhǔn)確測(cè)定底泥中抗生素的含量尤為重要。底泥樣品中抗生素的分析方法主要包括樣品的前處理方法和檢測(cè)方法。目前樣品前處理中常用的提取方法主要有索式萃取法、加速溶劑萃取法、超聲萃取法、微波萃取法等。其中，微波萃取法對(duì)容器中的溶劑和樣品直接進(jìn)行加熱，樣品與溶劑可在很短的時(shí)間內(nèi)升高到很高的溫度，提高了加熱速率，強(qiáng)化了溶劑萃取效率，具有時(shí)間短、節(jié)省試劑、回收率高等優(yōu)點(diǎn)，尤其適用于底泥等復(fù)雜基質(zhì)。同時(shí)，抗生素的種類多，物化性質(zhì)差異大，提取劑的選擇對(duì)回收率高低有著直接的影響。理想的環(huán)境樣品前處理方法是不破壞待測(cè)組分的形態(tài)，減少污染，并且能使待測(cè)組分與基質(zhì)有效分離。目前常用的檢測(cè)方法主要有高效液相色譜法(HLPC)和高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法(HPLC-MS/MS)。HPLC-MS/MS兼具HLPC強(qiáng)的分離能力，同時(shí)又具有MS高靈敏度和極強(qiáng)的定性鑒定能力，是目前檢測(cè)環(huán)境復(fù)雜基質(zhì)痕量抗生素殘留最有效的手段之一，具有分析范圍廣、分離能力強(qiáng)、定性分析結(jié)果可靠、檢測(cè)限低、分析時(shí)間快和自動(dòng)化程度高等優(yōu)點(diǎn)?？蓽?zhǔn)確地定性、定量測(cè)定復(fù)雜混合物的組分。

隨著抗生素在水產(chǎn)養(yǎng)殖過(guò)程中大量使用，對(duì)于能夠快速、靈敏、準(zhǔn)確地測(cè)定各種環(huán)境介質(zhì)中盡可能多的抗生素殘留存在迫切需要。然而，目前針對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖底泥中多種抗生素的分離富集和共檢測(cè)尚無(wú)一套完整可靠的檢測(cè)方法，現(xiàn)有的檢測(cè)方法普遍存在不穩(wěn)定、干擾多、檢測(cè)抗生素的種類和數(shù)量有限、回收率有限等問(wèn)題，因此，急需一種檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定、干擾小，能夠快速、高效、靈敏、準(zhǔn)確，同時(shí)檢測(cè)出水產(chǎn)養(yǎng)殖底泥中盡可能多的抗生素殘留的包括分離富集和共檢測(cè)的完整可靠的檢測(cè)方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的旨在克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供了一種檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定、干擾小、快速、高效的同時(shí)測(cè)定水產(chǎn)養(yǎng)殖底泥中15種目標(biāo)抗生素的方法，即一種微波萃取- 固相萃取前處理結(jié)合液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)同時(shí)檢測(cè)水產(chǎn)養(yǎng)殖底泥中15種抗生素的方法。

本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思如下：