[發明專利]一種益生菌中乳酸菌的檢測方法

有效

• 申請號: 201811496078.1
• 申請日: 2018-12-07
• 公開（公告）號: CN109541205B
• 公開（公告）日: 2022-01-28
• 發明（設計）人: 周莉;王法云;劉紅偉;關炳峰;張立攀;李向力;平洋;張亞勛;李遠遠;任釗;譚靜;羅蓓蓓;王珂;王瑞;陳儉春
• 申請（專利權）人: 河南省商業科學研究所有限責任公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569
• 代理公司: 鄭州翊博專利代理事務所(普通合伙) 41155
• 代理人: 付紅莉

本發明公開了一種益生菌中乳酸菌的檢測方法，屬于微生物制品的檢測技術領域。該方法包括：（1）將待測樣品加入到添加有BSAV的PBS緩沖液中，均質，制成樣品勻液，待測樣品與PBS緩沖液的用量比為1g:9mL；在樣品勻液中加入乳糖溶液，經水浴、離心分離除去上清液后得到菌懸液；（2）向步驟（1）所得的菌懸液中加入乳酸菌免疫磁珠，經混合、振蕩后于磁力架上靜置分層，棄上層，對下層樣品進行洗脫，在洗脫后的乳酸菌免疫磁珠中加入PBS緩沖液，振蕩重懸磁珠，得到樣品待測液；（3）將樣品待測液培養、觀察、檢測。本發明縮短了對樣品中乳酸菌的檢測時間，提高了乳酸菌的檢出率及檢測結果的準確性，且檢測靈敏度高。

技術領域

本發明屬于微生物制品的檢測技術領域，具體涉及一種益生菌中乳酸菌的檢測方法。

背景技術

益生菌作為一類能夠對宿主生理功能產生有益作用的活性微生物，具有調節腸道菌群、降低膽固醇、增強免疫力、緩解口腔疾病及情緒異常等作用，被廣泛應用于食品領域、醫藥領域以及畜牧領域。近年來，對益生菌中乳酸菌及其制品的研發、生產和銷售情況可以了解到乳酸菌菌在人體健康中起到的重要功效越來越受到研究人員和消費者的關注，乳酸菌主要包括雙歧桿菌、嗜熱鏈球菌和乳桿菌，對環境溫度較為敏感，乳酸菌制品在保藏及運輸過程中，可能會造成乳酸菌菌體失活，最終導致終產品中乳酸菌存活率下降的情況，故而，對終產品中乳酸菌的檢測具有重要意義。

目前益生菌中乳酸菌的檢測方法，主要依賴于傳統的微生物學檢測方法。傳統的國標檢測法至少3天才能出結果，培養時間較長、費時費力；此外，在實際檢測過程中，檢測環境不利于菌體生長及檢測時間長等因素，使得乳酸菌的生物活性存在下降甚至死亡的情況，導致終產品中益生菌的檢出率較實際樣品中低。因此，需要一種快速檢測乳酸菌的方法和手段。

發明內容

為解決背景技術中存在的技術問題，本發明的目的在于提供一種快速檢測益生菌中乳酸菌的方法，以提高待測樣品中益生菌的檢出率。

基于上述目的，本發明采用的技術方案為：

一種益生菌中乳酸菌的檢測方法，包括以下步驟：

1)將待測樣品加入到添加牛血清白蛋白（第五組份）（BSAV）的PBS緩沖液無菌均質袋中，均質，制成樣品勻液，待測樣品與PBS緩沖液的用量比為1g:9mL；將樣品勻液混勻后再加入乳糖溶液，經水浴后得到樣品菌液，對其離心分離除去上清液后得到菌懸液；

2)向驟1）所得的菌懸液中加入乳酸菌免疫磁珠，經混合、振蕩后于磁力架上靜置分層，棄上層，對下層樣品用洗脫液洗脫，在洗脫后的乳酸菌免疫磁珠中加入PBS緩沖液，振蕩重懸磁珠，得到樣品待測液；所述乳酸菌免疫磁珠采用鏈霉親和素修飾磁珠偶聯生物素標記的乳酸菌抗體制得；

3)將樣品待測液培養、觀察、檢測。

進一步地，所述乳酸菌為雙歧桿菌、嗜熱鏈球菌和乳桿菌的混合物；所述乳酸菌抗體為雙歧桿菌抗體、嗜熱鏈球菌抗體和乳桿菌抗體按照重量比4:3:3混勻后的混合物。

進一步地，步驟1）中，PBS緩沖液中BSAV的質量濃度為0.5%～5%；乳糖溶液與待測樣品的體積比為（0.2～2）︰1，乳糖溶液的濃度為1%～20%。

進一步地，步驟1）中，所述水浴溫度為35℃～50℃，水浴時間為3min；離心溫度為4℃，離心轉速為6000rmp，離心時間為1min～6min。

進一步地，步驟2）中，乳酸菌免疫磁珠的濃度為5mg/mL,乳酸菌免疫磁珠與樣品菌液的體積比為1︰50，所述洗脫液為濃度為0.02mol/L的PBS緩沖液。

進一步地，步驟2）中，菌懸液與免疫磁珠混合后振蕩的時間為0.5min～3min；所述靜置時間為2min；所述洗脫次數為2～3次。

進一步地，所述乳酸菌免疫磁珠的制備方法，包括以下步驟：