[發(fā)明專利]一種益生菌中乳酸菌的檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811496078.1
• 申請日: 2018-12-07
• 公開（公告）號: CN109541205B
• 公開（公告）日: 2022-01-28
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 周莉;王法云;劉紅偉;關(guān)炳峰;張立攀;李向力;平洋;張亞勛;李遠(yuǎn)遠(yuǎn);任釗;譚靜;羅蓓蓓;王珂;王瑞;陳儉春
• 申請（專利權(quán)）人: 河南省商業(yè)科學(xué)研究所有限責(zé)任公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569
• 代理公司: 鄭州翊博專利代理事務(wù)所(普通合伙) 41155
• 代理人: 付紅莉

1.一種益生菌中乳酸菌的檢測方法，其特征在于，所述乳酸菌為雙歧桿菌、嗜熱鏈球菌和乳桿菌的混合物，所述檢測方法包括以下步驟：

1)將待測樣品加入到添加有質(zhì)量濃度為1%的牛血清白蛋白第五組分的PBS緩沖液中，均質(zhì)，制成樣品勻液，待測樣品與PBS緩沖液的用量比為1g:9mL；將樣品勻液混勻后再加入濃度為5%的乳糖溶液，乳糖溶液與待測樣品的體積比為0.8︰1，經(jīng)45℃水浴3min后得到樣品菌液，在離心溫度為4℃，離心轉(zhuǎn)速為6000rpm條件下，離心3min分離除去上清液后得到菌懸液；

2)向步驟1）所得的菌懸液中加入濃度為5mg/mL的乳酸菌免疫磁珠，乳酸菌免疫磁珠與樣品菌液的體積比為1︰50，經(jīng)混合、振蕩1min后于磁力架上靜置2min分層，棄上層，對下層樣品用濃度為0.02mol/L的PBS緩沖液進(jìn)行洗脫，重復(fù)振蕩、磁分離和洗脫過程2～3次，在洗脫后的乳酸菌免疫磁珠中加入PBS緩沖液，振蕩重懸磁珠，得到樣品待測液；所述乳酸菌免疫磁珠采用鏈霉親和素修飾磁珠偶聯(lián)生物素標(biāo)記的乳酸菌抗體制得；所述乳酸菌抗體為雙歧桿菌抗體、嗜熱鏈球菌抗體和乳桿菌抗體按照重量比為4:3:3混勻后的混合物；

3)將樣品待測液培養(yǎng)、觀察、檢測。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的益生菌中乳酸菌的檢測方法，其特征在于，所述乳酸菌免疫磁珠的制備方法，包括以下步驟：

a)用0.01mol/L磷酸鹽-吐溫20緩沖液稀釋乳酸菌抗體至1mg/mL，用無水DMSO配制10mg/mL生物素N-羥基琥珀酰亞胺酯溶液，在生物素N-羥基琥珀酰亞胺酯溶液中加入稀釋的乳酸菌抗體進(jìn)行混合，生物素N-羥基琥珀酰亞胺酯溶液與乳酸菌抗體的體積比為4︰1，室溫下孵育，即得生物素標(biāo)記的乳酸菌抗體；

b)在生物素標(biāo)記的乳酸菌抗體中加入1mg已活化溶解的鏈霉素親和素修飾磁珠進(jìn)行混合，得到抗體與磁珠的混合物，室溫放置；

c)在步驟b)所得的混合物中加入9.6μL 1mol/L NH₄Cl溶液，室溫孵育；上1ml的分子篩柱，以PBS緩沖液洗脫，收集1ml/管，加入PBS緩沖液與0.01%疊氮鈉的混合液，置-20℃避光保存。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的益生菌中乳酸菌的檢測方法，其特征在于，所述步驟a)中磷酸鹽-吐溫20緩沖液的pH值為7.4。