[發(fā)明專利]一種山羊環(huán)狀RNA circ_ZCCHC2及其鑒定方法及應(yīng)用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811495213.0
• 申請日: 2018-12-07
• 公開（公告）號: CN109609656B
• 公開（公告）日: 2022-04-19
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陶虎;陳明新;劉洋;熊琪;李曉鋒;索效軍;張年;楊前平;田宏;張鶴山;熊軍波;張鳳
• 申請（專利權(quán)）人: 湖北省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/113
• 代理公司: 武漢智嘉聯(lián)合知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 42231
• 代理人: 黃君軍

本發(fā)明提出一種山羊環(huán)狀RNA circ_ZCCHC2及其鑒定方法及應(yīng)用，通過山羊環(huán)狀RNAcirc_ZCCHC24超表達載體質(zhì)粒的構(gòu)建方法構(gòu)建的超表達載體含有環(huán)狀RNA表達載體pCD2.1?ciR和山羊環(huán)狀RNAcirc_ZCCHC24的全長序列信息，能夠促進山羊卵泡顆粒細胞的增殖，通過該山羊環(huán)狀RNAcirc_ZCCHC24將為進一步解析山羊卵泡顆粒細胞發(fā)育的遺傳機理提供了新的思路，對于研究山羊繁殖性狀的遺傳本質(zhì)及培育高繁山羊品種具有重要的意義。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及基因工程技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種山羊環(huán)狀RNA circ_ZCCHC2及其鑒定方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)

環(huán)狀RNA(Circular RNAs,circRNA)是一種新型的內(nèi)源性非編碼RNA，它是在mRNA前體(pre-mRNA)剪切過程中，外顯子和(或)內(nèi)含子的5’端與3’端以反向剪切(BackSplicing)形式連接3’和5’磷脂鍵，最終形成共價閉合環(huán)狀RNA分子。根據(jù)構(gòu)成不同，circRNA分為外顯子circRNA(exonic circRNA)、內(nèi)含子circRNA(intronic circRNA,ciRNAs)和外顯子-內(nèi)含子circRNA(exon-intron circRNA,EIciRNAs)。CircRNA在細胞核內(nèi)調(diào)控來源基因(Host gene)的表達，在細胞質(zhì)內(nèi)則發(fā)揮ceRNA(competing endogenousRNAs,內(nèi)源性競爭RNA)的作用。繼miRNA和lncRNA后，circRNA已成為非編碼RNA研究領(lǐng)域的新熱點。

circRNAs主要通過三種機制發(fā)揮調(diào)控功能：(1)作為miRNA的海綿吸附體調(diào)控基因的表達(ceRNA)；(2)circRNA結(jié)合RNA結(jié)合蛋白(RBP)以形成RNA-蛋白復(fù)合物(RPC)，調(diào)控線性親本基因的轉(zhuǎn)錄；(3)已經(jīng)有數(shù)篇論文研究發(fā)現(xiàn)circRNA可編碼蛋白質(zhì)，發(fā)揮生物學(xué)功能。

卵泡發(fā)育機制的研究文獻眾多，取得了大量重要結(jié)論，但是在非編碼RNA，尤其是circRNA調(diào)控卵泡發(fā)育的研究仍非常有限。早在1993年，Capel等人就在在小鼠精子決定基因SRY中發(fā)現(xiàn)了環(huán)狀RNA，并且SRY也被證實可以吸附miR-138，發(fā)揮miRNA海綿作用。Cheng等研究發(fā)現(xiàn)，在孕產(chǎn)婦衰老過程中，人類卵巢顆粒細胞中circRNA可能在葡萄糖代謝、有絲分裂細胞周期和卵巢激素生成過程中發(fā)揮作用。但circRNA具有多種途徑發(fā)揮調(diào)控作用，例如可以吸附miRNA、通過影響其靶基因的表達來實現(xiàn)功能。眾所周知，miRNA具有強大的生物學(xué)功能，在卵泡發(fā)育中的作用已得到大量證明，因此提出circRNA通過miRNA來調(diào)控卵泡發(fā)育這一假設(shè)具有充足的理由。對于補充circRNA在家畜卵泡發(fā)育中的作用機制、豐富卵泡發(fā)育的調(diào)控信號具有重要意義。因此，本發(fā)明提出一種山羊環(huán)狀RNA circ_ZCCHC2及其鑒定方法及應(yīng)用，以解決現(xiàn)有技術(shù)中的不足之處。

發(fā)明內(nèi)容

針對上述問題，本發(fā)明提出了一種山羊環(huán)狀RNA，名稱為circ_ZCCHC24，提供了一種circ_ZCCHC24的檢測方法和功能應(yīng)用，通過提供了一種山羊環(huán)狀RNA circ_ZCCHC24的鑒定和構(gòu)建超表達載體的方法，詳盡的驗證了山羊環(huán)狀RNA circ_ZCCHC24是否成環(huán)及超表達載體在檢測山羊卵泡顆粒細胞增殖分化過程中的作用，通過將山羊環(huán)狀RNA circ_ZCCHC24的表達載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)染山羊卵泡顆粒細胞。與空白對照組比較發(fā)現(xiàn)，超表達山羊環(huán)狀RNAcirc_ZCCHC24促進山羊卵泡顆粒細胞的增殖，這一新發(fā)現(xiàn)的山羊環(huán)狀RNA將為進一步解析山羊卵泡顆粒細胞發(fā)育的遺傳機理提供了新的思路，對于研究山羊繁殖性狀的遺傳本質(zhì)及培育高繁殖力山羊品種具有重要的意義。

本發(fā)明提出一種山羊環(huán)狀RNA，包括山羊環(huán)狀RNA circ_ZCCHC24，所述山羊環(huán)狀RNA circ_ZCCHC24的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示。