[發(fā)明專利]煙草抗腫瘤活性組分的提取方法及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811490985.5
• 申請(qǐng)日: 2018-12-07
• 公開（公告）號(hào): CN109453261A
• 公開（公告）日: 2019-03-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張耀洲;張時(shí)山;張武華;陳玉皎;聶開美;周澤潤(rùn);牛亞茹;王豐;耿召良;蘇賢坤
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 貴州貴安精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)研究院股份有限公司;貴州省煙草科學(xué)研究院
• 主分類號(hào): A61K36/81
• 分類號(hào): A61K36/81;A61P35/00
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

本發(fā)明提供了一種煙草抗腫瘤活性組分的提取方法及其應(yīng)用，屬于煙草產(chǎn)品加工提取技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明通過(guò)對(duì)煙草原料進(jìn)行預(yù)處理，并針對(duì)預(yù)處理后的煙草原料依次進(jìn)行常溫提取、高溫提取、甲醇提取、丙酮提取、液相色譜分離等操作，且使用高極性溶劑純化水、甲醇、丙酮作為提取溶劑，通過(guò)采用不同提取溶劑不同提取條件，可以實(shí)現(xiàn)將煙草原料中的煙草活性組分充分提取，提高煙草活性組分的提取含量。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)該目的組分具有抗腫瘤功能，可開發(fā)成為預(yù)防和治療腫瘤的藥物。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及煙草產(chǎn)品加工提取技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種煙草抗腫瘤活性組分的提取方法及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

煙草也稱仙草，是一味傳統(tǒng)的中藥材，它的無(wú)機(jī)成分包括水、礦質(zhì)元素；有機(jī)成分主要包括糖類、生物堿、雜環(huán)類、色素、酚類、萜類、有機(jī)酸類、脂質(zhì)類、醇類、醛酮類等。其中，煙草中有機(jī)成分具有抗菌、抗病毒、抗腫瘤、抗氧化活性、清除體內(nèi)自由基等多種功能。

目前，為了實(shí)現(xiàn)對(duì)煙草活性組分的提取，一般采用超臨界提取、索氏提取、超聲波提取方式。采用無(wú)水乙醇、正己烷、丙酮、乙酸乙酯、石油醚、二氯甲烷作為提取溶劑。其中低極性溶劑如石油醚、正己烷，中極性溶劑丙酮、二氯甲烷，這些溶劑多為易揮發(fā)、易燃、有毒溶劑，對(duì)工業(yè)生產(chǎn)設(shè)備、人員等要求高，且得到的煙草活性組分的含量少，這就大大限制了煙草活性組分的進(jìn)一步研究和應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)上述問(wèn)題，本發(fā)明提供一種煙草抗腫瘤活性組分的提取方法及其應(yīng)用，以提高煙草活性組分的提取量。

第一方面，本發(fā)明提供了一種煙草抗腫瘤活性組分的提取方法，該方法包括以下步驟：

(1)預(yù)處理：對(duì)煙草原料進(jìn)行烘干處理，以及將烘干處理后的煙草原料進(jìn)行超微粉碎處理，得到煙草超微粉；

(2)常溫水提：在煙草超微粉中加入提取溶劑，在常溫條件下進(jìn)行提取操作；對(duì)提取操作后的煙草超微粉進(jìn)行離心處理，并收集離心處理后的沉淀物；步驟(2)中的提取溶劑為純化水；

(3)高溫水提：在步驟(2)中收集的沉淀物中加入提取溶劑，在90-100℃的提取溫度下進(jìn)行濃縮提取操作；對(duì)濃縮提取操作后得到的濃縮提取液進(jìn)行降溫處理、離心處理，并收集離心處理后的沉淀物；步驟(3)中的提取溶劑為純化水；

(4)甲醇提取：在步驟(3)中得到的沉淀物中加入提取溶劑，在0-4℃的提取溫度下進(jìn)行浸提提取操作，對(duì)浸漬提取物進(jìn)行離心處理，并收集離心處理后的上清，將收集的上清進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮烘干處理，得到甲醇提取上清濃縮浸膏(TMS)；步驟(4)中的提取溶劑為85-100％的甲醇；

(5)丙酮提取：在步驟(4)中得到的沉淀物中加入提取溶劑，在0-4℃的提取溫度下進(jìn)行浸提提取操作，對(duì)浸漬提取物進(jìn)行離心處理，并收集離心處理后的上清，將收集的上清進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮烘干/低溫冷凍干燥處理，得到丙酮提取上清濃縮浸膏/丙酮提取上清凍干粉(TAS)；步驟(5)中的提取溶劑為85-100％的丙酮；

(6)色譜分離及組分活性篩選：

(a)取步驟(5)中得到的丙酮提取上清濃縮浸膏/丙酮提取上清凍干粉(TAS)用60％甲醇-水溶液進(jìn)行溶解，得到濃度為0.25g/mL樣品，用制備液相進(jìn)行分離，洗脫方式為：5％甲醇-水溶液等度洗脫，15％甲醇-水溶液等度洗脫，20％甲醇-水溶液等度洗脫，30％甲醇-水溶液等度洗脫，40％甲醇-水溶液等度洗脫，50％甲醇-水溶液等度洗脫，55％甲醇-水溶液等度洗脫，65％甲醇-水溶液等度洗脫，100％甲醇等度洗脫，檢測(cè)波長(zhǎng)為260nm，得到各組分經(jīng)體外抗腫瘤活性篩選后，選取活性組分12進(jìn)行旋蒸濃縮干燥；