[發明專利]煙草抗腫瘤活性組分的提取方法及其應用

在審

• 申請號: 201811490985.5
• 申請日: 2018-12-07
• 公開（公告）號: CN109453261A
• 公開（公告）日: 2019-03-12
• 發明（設計）人: 張耀洲;張時山;張武華;陳玉皎;聶開美;周澤潤;牛亞茹;王豐;耿召良;蘇賢坤
• 申請（專利權）人: 貴州貴安精準醫學研究院股份有限公司;貴州省煙草科學研究院
• 主分類號: A61K36/81
• 分類號: A61K36/81;A61P35/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種煙草抗腫瘤活性組分的提取方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)預處理：對煙草原料進行烘干處理，以及將烘干處理后的煙草原料進行超微粉碎處理，得到煙草超微粉；

(2)常溫水提：在煙草超微粉中加入提取溶劑，在常溫條件下進行提取操作；對提取操作后的煙草超微粉進行離心處理，并收集離心處理后的沉淀物；步驟(2)中的提取溶劑為純化水；

(3)高溫水提：在步驟(2)中收集的沉淀物中加入提取溶劑，在90-100℃的提取溫度下進行濃縮提取操作；對濃縮提取操作后得到的濃縮提取液進行降溫處理、離心處理，并收集離心處理后的沉淀物；步驟(3)中的提取溶劑為純化水；

(4)甲醇提取：在步驟(3)中得到的沉淀物中加入提取溶劑，在0-4℃的提取溫度下進行浸提提取操作，對浸漬提取物進行離心處理，并收集離心處理后的上清，將收集的上清進行旋轉蒸發濃縮烘干處理，得到甲醇提取上清濃縮浸膏(TMS)；步驟(4)中的提取溶劑為85-100％的甲醇；

(5)丙酮提取：在步驟(4)中得到的沉淀物中加入提取溶劑，在0-4℃的提取溫度下進行浸提提取操作，對浸漬提取物進行離心處理，并收集離心處理后的上清，將收集的上清進行旋轉蒸發濃縮烘干/低溫冷凍干燥處理，得到丙酮提取上清濃縮浸膏/丙酮提取上清凍干粉(TAS)；步驟(5)中的提取溶劑為85-100％的丙酮；

(6)色譜分離及組分活性篩選：

(a)取步驟(5)中得到的丙酮提取上清濃縮浸膏/丙酮提取上清凍干粉(TAS)用60％甲醇-水溶液進行溶解，得到濃度為0.25g/mL樣品，用制備液相進行分離，洗脫方式為：5％甲醇-水溶液等度洗脫，15％甲醇-水溶液等度洗脫，20％甲醇-水溶液等度洗脫，30％甲醇-水溶液等度洗脫，40％甲醇-水溶液等度洗脫，50％甲醇-水溶液等度洗脫，55％甲醇-水溶液等度洗脫，65％甲醇-水溶液等度洗脫，100％甲醇等度洗脫，檢測波長為260nm，得到各組分經體外抗腫瘤活性篩選后，選取活性組分12進行旋蒸濃縮干燥；

(b)取活性組分12用無水乙醇進行溶解，得到濃度為0.25g/mL樣品，用制備液相進行分離，洗脫方式為100％正己烷等度洗脫，85％正己烷-乙醇溶液等度洗脫，70％正己烷-乙醇溶液等度洗脫，60％正己烷-乙醇溶液等度洗脫，檢測波長為260nm，得到各組分經體外抗腫瘤活性篩選后，選取活性組分4(以下均稱為TA-150-12-4)進行旋蒸濃縮干燥；

(7)結構分析：取步驟(6)中得到活性組分TA-150-12-4進行質譜分析。色譜條件：5％-100％甲醇-水溶液10min；100％甲醇5min；質譜條件：正離子模式一級質譜；參比離子質荷比：121.050873和922.009798。

2.根據權利要求1所述的從煙草中提取抗腫瘤活性組分的方法，其特征在于：所述步驟(1)中的中的超微粉碎處理是將烘干處理后的煙草原料，使用50-80目篩網的粉碎機進行粉碎處理，并對粉碎處理后的煙草原料，使用超微粉碎機進行粉碎處理，得到所述煙草超微粉。

3.根據權利要求1所述的從煙草中提取抗腫瘤活性組分的方法，其特征在于：所述步驟(3)中的離心處理是指將降溫處理后的所述濃縮提取液置于離心瓶中，離心溫度為8-12℃，離心時間為0.5-1.5h，轉速為3000-6000rpm/min。

4.根據權利要求1所述的從煙草中提取抗腫瘤活性組分的方法，其特征在于：所述步驟(4)中加入提取溶劑的質量是沉淀物的質量的1.5-2.5倍。

5.根據權利要求1所述的從煙草中提取抗腫瘤活性組分的方法，其特征在于：所述步驟(4)中的浸漬提取操作是指每隔0.5h攪拌一次，提取時間為12-24h。

6.根據權利要求1所述的從煙草中提取抗腫瘤活性組分的方法，其特征在于：所述步驟(4)中的濃縮烘干處理的溫度為60-70℃。