[發明專利]多種氨基酸和肉堿釋放劑檢測前處理方法和質譜分析方法

在審

• 申請號: 201811489000.7
• 申請日: 2018-12-06
• 公開（公告）號: CN109540622A
• 公開（公告）日: 2019-03-29
• 發明（設計）人: 魏磊
• 申請（專利權）人: 揚州諾明哲天醫學檢驗實驗室有限公司
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N27/62
• 代理公司: 北京聯瑞聯豐知識產權代理事務所(普通合伙) 11411
• 代理人: 黃冠華

本發明公開了多種氨基酸和肉堿釋放劑檢測前處理方法和質譜分析方法，包括多種氨基酸和肉堿釋放劑檢測的前處理方法與多種氨基酸和肉堿釋放劑檢測的質譜分析方法，多種氨基酸和肉堿釋放劑檢測的前處理方法，本發明涉及生物成份檢測技術領域。該多種氨基酸和肉堿釋放劑檢測前處理方法和質譜分析方法，可實現在采用質譜技術進行生物病理檢測時，避免樣本分類混亂的情況發生，大大增強了前處理效果，保證了后期的質譜檢測精度，同時可大大提高質譜設備的分析精確度，防止得到的質譜圖像模糊不夠準確，很好的實現了通過對質譜圖進行平滑算法處理，使質譜圖能夠清晰的體現出來，從而大大方便了相關人員的生物成份質譜檢測工作。

技術領域

本發明涉及生物成份檢測技術領域，具體為多種氨基酸和肉堿釋放劑檢測前處理方法和質譜分析方法。

背景技術

生物檢測是近年來高速發展的學科之一，其概念和范圍也在不斷變化，狹義的生物檢測技術是利用生物體對被檢測物質的特有反應而鑒定被檢物質的質量和功效的方法，其所用生物體主要是各種微生物和某些動物，檢測的范圍主要是生物效價測定和安全性的試驗，生物檢測是以現代生物工程技術為核心，闡述生物過程及產品的理化及功能的分析檢測手段和方法，如基因及基因組學、蛋白及蛋白組學、次生產物有效成分、酶、細胞、功效及毒理和代謝的分析檢測，具有較強的集成性和實用性，生物質譜技術正成為蛋白質鑒定分析的主要支撐技術，它通過測定樣品離子的質荷比(m/z)來進行成分和結構分析，雙向凝膠電泳分離的蛋白質點數目多、量少，其鑒定方法是利用蛋白質的各種屬性參數如相對分子質量、等電點、序列、氨基酸組成、肽質量指紋譜等在蛋白質數據庫中檢索，尋找與這些參數相符的蛋白質，若在數據庫中找不到，有可能是發現了新蛋白質，要進行序列分析，進一步合成DNA探針來表達、分離和鑒定它。

目前在采用質譜技術進行生物病理檢測時，樣本分類較為混亂，且前處理效果較差，給后期的質譜檢測帶來了極大的不便，不能實現通過對每個待處理的樣本進行標記來確認樣本類型，無法達到通過氮吹和復溶來加強樣本的前處理效果，同時現有的質譜分析精確度較低，得到的質譜圖像模糊不夠準確，不能實現通過對質譜圖進行平滑算法處理，使質譜圖能夠清晰的體現出來，從而給相關人員的生物成份質譜檢測工作帶來了極大的不便。

發明內容

(一)解決的技術問題

針對現有技術的不足，本發明提供了多種氨基酸和肉堿釋放劑檢測前處理方法和質譜分析方法，解決了目前在采用質譜技術進行生物病理檢測時，樣本分類較為混亂，且前處理效果較差，給后期的質譜檢測帶來了極大的不便，同時現有的質譜分析精確度較低，得到的質譜圖像模糊不夠準確的問題。

(二)技術方案

為實現以上目的，本發明通過以下技術方案予以實現：多種氨基酸和肉堿釋放劑檢測前處理方法和質譜分析方法，包括多種氨基酸和肉堿釋放劑檢測的前處理方法與多種氨基酸和肉堿釋放劑檢測的質譜分析方法，所述多種氨基酸和肉堿釋放劑檢測的前處理方法，具體包括以下步驟：

S1、提取液的制備和標記：首先將經確認的待測樣本、釋放劑NBS－X1、釋放劑NBS－F3、內標液和質控品取出放置23-27℃室溫內，并混勻，然后取內標液1ml，加入99ml釋放劑NBS－X1混勻，即可得到得提取液，之后將96孔蛋白過濾板和平底板A排朝上，在蛋白過濾板靠近H排的側面及平底板的背面用記號筆標注檢測日期及板號，并在平底板近H排的側面用記號筆劃線做標記；

S2、打孔取樣提取：用Φ3.0mm打孔器在樣本干血片的血斑中心上打孔取樣，用一次性注射針頭將3mm血斑放置于蛋白過濾板底部，按空白樣、質控品Z1和Z2、待測樣順序依次進行放置，然后在蛋白過濾板內的質控樣和待測樣中分別加入提取液100μl，之后用封板塑料膜密封蛋白過濾板后，放入微孔板恒溫振蕩器中在室溫和500rpm條件下，振搖30min；