[發(fā)明專利]多種氨基酸和肉堿釋放劑檢測前處理方法和質(zhì)譜分析方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811489000.7
• 申請日: 2018-12-06
• 公開（公告）號: CN109540622A
• 公開（公告）日: 2019-03-29
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 魏磊
• 申請（專利權(quán)）人: 揚州諾明哲天醫(yī)學(xué)檢驗實驗室有限公司
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N27/62
• 代理公司: 北京聯(lián)瑞聯(lián)豐知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11411
• 代理人: 黃冠華

1.多種氨基酸和肉堿釋放劑檢測前處理方法和質(zhì)譜分析方法，包括多種氨基酸和肉堿釋放劑檢測的前處理方法與多種氨基酸和肉堿釋放劑檢測的質(zhì)譜分析方法，其特征在于：所述多種氨基酸和肉堿釋放劑檢測的前處理方法，具體包括以下步驟：

S1、提取液的制備和標(biāo)記：首先將經(jīng)確認(rèn)的待測樣本、釋放劑NBS－X1、釋放劑NBS－F3、內(nèi)標(biāo)液和質(zhì)控品取出放置23-27℃室溫內(nèi)，并混勻，然后取內(nèi)標(biāo)液1ml，加入99ml釋放劑NBS－X1混勻，即可得到得提取液，之后將96孔蛋白過濾板和平底板A排朝上，在蛋白過濾板靠近H排的側(cè)面及平底板的背面用記號筆標(biāo)注檢測日期及板號，并在平底板近H排的側(cè)面用記號筆劃線做標(biāo)記；

S2、打孔取樣提取：用Φ3.0mm打孔器在樣本干血片的血斑中心上打孔取樣，用一次性注射針頭將3mm血斑放置于蛋白過濾板底部，按空白樣、質(zhì)控品Z1和Z2、待測樣順序依次進行放置，然后在蛋白過濾板內(nèi)的質(zhì)控樣和待測樣中分別加入提取液100μl，之后用封板塑料膜密封蛋白過濾板后，放入微孔板恒溫振蕩器中在室溫和500rpm條件下，振搖30min；

S3、離心過濾和氮吹：將密封的蛋白過濾板與下層匹配的平底板一起放置在96孔板離心機中，對稱擺放，在4000rpm條件下，離心5min，然后打開氮氣瓶閥，調(diào)節(jié)氣瓶分壓閥至分壓在0.3-0.4MPa，將氮吹儀吹氣口面旋轉(zhuǎn)90°，調(diào)節(jié)氮吹儀壓力閥使轉(zhuǎn)子上緣至刻度為40LPM，將平底板平穩(wěn)放在氮吹儀臺面上，將氮吹儀吹氣口面旋轉(zhuǎn)至正對平底板，緩慢調(diào)節(jié)使氮吹儀臺面上升至氮吹儀出氣口略微伸入平底板，10min后略向上調(diào)整氮吹儀臺面，20min后將平底板取出，用手電筒光從平底板底部照射，仔細(xì)觀察平底板內(nèi)有無液體，致平底孔板內(nèi)無液體后停止氮吹；

S4、衍生化反應(yīng)：從冰箱中取出釋放劑NBS－Z2，混勻，在平底板內(nèi)的質(zhì)控樣和待測樣中分別加入50μl釋放劑NBS－Z2，在平底板上用封板鋁膜密封后，放入微孔板恒溫振蕩器在60℃和600rpm條件下，振搖衍生30min；

S5、氮吹、復(fù)溶和離心：揭去封板鋁膜，設(shè)置氮吹儀溫度至60℃，打開氮氣瓶閥，調(diào)節(jié)氮吹儀分壓表壓力調(diào)至0.02Mpa，將平底板平穩(wěn)放在氮吹儀臺面上，緩慢調(diào)節(jié)使氮吹儀出氣口略微深入平底板，15min后將平底板取出，用手電筒光從平底板底部照射，仔細(xì)觀察平底板內(nèi)有無液體，至平底板內(nèi)無水漬后停止氮吹，在平底板內(nèi)的空白樣、質(zhì)控樣和待測樣中分別加入100μl釋放劑NBS－F3，用錫箔紙密封后放入微孔板恒溫振蕩器在室溫和500rpm的條件下，振搖10min，之后將密封的平底板放置在96孔板離心機中，對稱擺放，在4000rpm條件下，離心5min，即可完成檢測前處理；

S6、測試后整理：將測試后剩余待測樣裝入自封袋內(nèi)并在袋外貼標(biāo)簽注明檢測項目、檢測日期及檢品數(shù)量后放入冰箱冷藏保存，將測試后剩余試劑及質(zhì)控品放回冰箱冷藏保存，超聲清洗氮吹儀針頭，最后將移液槍掛于移液器架，補齊槍頭盒內(nèi)的槍頭，清理實驗臺桌面。