[發明專利]一種脂蛋白(a)的制備方法

在審

• 申請號: 201811487639.1
• 申請日: 2018-12-06
• 公開（公告）號: CN109485715A
• 公開（公告）日: 2019-03-19
• 發明（設計）人: 張波;劉振國;郝樹彬
• 申請（專利權）人: 濰坊澤成生物技術有限公司
• 主分類號: C07K14/47
• 分類號: C07K14/47;C07K1/30
• 代理公司: 北京中索知識產權代理有限公司 11640
• 代理人: 宋濤

本發明適用于生物檢測技術領域，提供了一種脂蛋白(a)的制備方法，包括如下步驟：向血清中加入大分子化合物和金屬離子，混勻后離心，然后取一次沉淀；向一次沉淀中加入緩沖液，再加入金屬離子進行攪拌溶解，溶解后進行離心，取上清液；向上清液中加入非選擇性沉淀劑，反應完全后進行離心，然后取二次沉淀；向二次沉淀中加入緩沖液，然后加入金屬離子，溶解沉淀，得到脂蛋白(a)，再進行純化。借此，本發明能夠提高脂蛋白(a)的制備速率，制備成本低、時間短，純化產物產出量高。

技術領域

本發明涉及生物檢測技術領域，具體涉及一種脂蛋白(a)的制備方法。

背景技術

脂蛋白(a)是由類似于脂蛋白和載脂蛋白(a)組成的一種特殊脂蛋白，在肝臟中合成，主要的功能是阻止血管內血塊溶解，促進動脈粥樣硬化形成。脂蛋白水平持續升高與心絞痛、心肌梗死、腦溢血有密切關系。目前，絕大多數脂蛋白(a)測定方法是免疫測定法，在測定時需要一定純度及完全活性的脂蛋白(a)作為標準品。

現有技術中，脂蛋白(a)的制備方法主要有植物凝集素法，超速離心法和瓊脂糖電泳法等，這些方法都需要用到超速離心機，超速離心機在使用過程中，需要20個小時左右才能夠將脂蛋白(a)或者脂蛋白(a)的中間制備產物分離，耗時較長；同時，超速離心機一般價格昂貴，且使用壽命比較短，提高了制備成本；這些方法在實施過程中需要用到包括超速離心機在內的多種儀器，操作繁瑣，對工作人員的技術要求高；另外，現有技術制備的脂蛋白(a)產量比較低，一般為50％左右。

綜上可知，現有技術在實際應用中顯然存在不足之處，有必要加以改進。

發明內容

針對上述技術缺陷，本發明的目的在于提供一種脂蛋白(a)的制備方法，其采用大分子化合物沉淀脂蛋白(a)，使用的儀器、設備和試劑耗材少，制備成本低，操作簡單，適合脂蛋白(a)的批量純化；脂蛋白(a)的制備可在2小時內完成，制備時間短，效率高；純化產物產出量高，在87.3％以上。

為了實現上述目的，本發明提供一種脂蛋白(a)的制備方法，包括如下步驟：

步驟一沉淀脂蛋白(a)

向血清中加入大分子化合物和金屬離子，大分子化合物的濃度為0.1～10％，然后混勻，混勻后離心，然后取一次沉淀。

步驟二沉淀的溶解

向所述一次沉淀中加入緩沖液，緩沖液的濃度為0.01～0.1mol/L；再加入金屬離子進行攪拌溶解，溶解后進行離心，然后取上清液。

步驟三化合物及金屬離子的去除

向所述上清液中加入非選擇性沉淀劑，進行沉淀反應，非選擇性沉淀劑的濃度為1.0～5.0％，非選擇性沉淀劑的加入量為上清液體積的8～12％；反應完全后進行離心，然后取二次沉淀；

向所述二次沉淀中加入緩沖液，然后加入金屬離子，溶解沉淀，得到脂蛋白(a)。

步驟四純化脂蛋白(a)

采用國家標準檢測方法對步驟三中的脂蛋白(a)進行純化，并計算純化產出量。

根據本發明的一種脂蛋白(a)的制備方法，所述金屬離子的濃度為0.01～0.1mol/L。

根據本發明的一種脂蛋白(a)的制備方法，所述金屬離子為NaCl、KI、KCL、NaI、KBr、MgCl₂、CaCl₂、MnCl₂中的任意一種。

根據本發明的一種脂蛋白(a)的制備方法，所述金屬離子為MgCl₂、CaCl₂、MnCl₂中的任意一種。