[發(fā)明專利]一種脂蛋白(a)的制備方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201811487639.1 | 申請日： | 2018-12-06 |
| 公開（公告）號： | CN109485715A | 公開（公告）日： | 2019-03-19 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 張波;劉振國;郝樹彬 | 申請（專利權(quán)）人： | 濰坊澤成生物技術(shù)有限公司 |
| 主分類號： | C07K14/47 | 分類號： | C07K14/47;C07K1/30 |
| 代理公司： | 北京中索知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11640 | 代理人： | 宋濤 |
| 地址： | 261061 山東省濰坊市高新區(qū)清池街道東*** | 國省代碼： | 山東;37 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 脂蛋白 制備 金屬離子 二次沉淀 一次沉淀 緩沖液 溶解 大分子化合物 生物檢測技術(shù) 純化產(chǎn)物 非選擇性 攪拌溶解 取上清液 沉淀劑 血清 混勻 清液 沉淀 | ||
1.一種脂蛋白(a)的制備方法，其特征在于，包括如下步驟：
步驟一 沉淀脂蛋白(a)
向血清中加入大分子化合物和金屬離子，所述大分子化合物的濃度為0.1～10％，然后混勻，混勻后離心，然后取一次沉淀；
步驟二 沉淀的溶解
向所述一次沉淀中加入緩沖液，所述緩沖液的濃度為0.01～0.1mol/L；再加入所述金屬離子進行攪拌溶解，溶解后進行離心，然后取上清液；
步驟三 化合物及金屬離子的去除
向所述上清液中加入非選擇性沉淀劑，進行沉淀反應(yīng)，所述非選擇性沉淀劑的濃度為1.0～5.0％，所述非選擇性沉淀劑的加入量為所述上清液體積的8～12％；反應(yīng)完全后進行離心，然后取二次沉淀；
向所述二次沉淀中加入所述緩沖液，然后加入所述金屬離子，溶解沉淀，得到脂蛋白(a)；
步驟四 純化脂蛋白(a)
采用國家標準檢測方法對所述脂蛋白(a)進行純化，并計算純化產(chǎn)出量。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種脂蛋白(a)的制備方法，其特征在于，所述金屬離子的濃度為0.01～0.1mol/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種脂蛋白(a)的制備方法，其特征在于，所述金屬離子為NaCl、KI、KCL、NaI、KBr、MgCl2、CaCl2、MnCl2中的任意一種。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種脂蛋白(a)的制備方法，其特征在于，所述金屬離子為MgCl2、CaCl2、MnCl2中的任意一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種脂蛋白(a)的制備方法，其特征在于，所述大分子化合物與所述血清的體積比為1～10:100。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種脂蛋白(a)的制備方法，其特征在于，所述大分子化合物為肝素、PVP、DS中的任意一種或者幾種。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種脂蛋白(a)的制備方法，其特征在于，所述大分子化合物為肝素和DS，且肝素和DS的體積比為1:4～7。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種脂蛋白(a)的制備方法，其特征在于，所述緩沖液的pH為5.0～9.0。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種脂蛋白(a)的制備方法，其特征在于，所述緩沖液與所述一次沉淀的體積比為0.8～1.3：10；所述緩沖液與所述二次沉淀的體積比為0.8～1.3：10。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種脂蛋白(a)的制備方法，其特征在于，所述非選擇性沉淀劑為硫酸銨、硫酸鈉或聚乙二醇中的任意一種。
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