[發明專利]一種基于BTNAA體系檢測犬瘟熱病毒的引物對、引物和探針組合物、試劑及試劑盒

在審

• 申請號: 201811487274.2
• 申請日: 2018-12-06
• 公開（公告）號: CN109371171A
• 公開（公告）日: 2019-02-22
• 發明（設計）人: 劉萌;陳科;吳瓊;陳姣姣;劉國憲
• 申請（專利權）人: 寧波匠神生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12N15/11
• 代理公司: 余姚德盛專利代理事務所(普通合伙) 33239
• 代理人: 吳曉微

本發明公開了一種基于BTNAA體系檢測犬瘟熱病毒的引物對、引物和探針組合物、試劑及試劑盒；所述引物對包括上游引物和下游引物；所述上游引物和所述下游引物的序列分別如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，具體如下：上游引物：CTGCTMGCTAAAGCRGTGACTGCTCCTGATAC；下游引物：CAATTCTAGGCTTGTTCCCTGGGGATCGTTTG。本發明具有在具備溫控功能的熒光檢測儀器中，在42℃等溫條件下對犬瘟熱病毒進行快速、實時、靈敏、準確、便捷的檢測的優點。本發明相比傳統PCR法更為便捷、快速，在沒有實驗室條件的寵物店、小型寵物診所做到對犬瘟熱病毒進行便捷、快速和精確的檢測。

技術領域

本發明涉及分子生物學技術領域，具體涉及一種基于BTNAA體系檢測犬瘟熱病毒的引物對、引物和探針組合物、試劑及試劑盒。

背景技術

犬瘟熱(Canine Distemper)是由副黏病毒科、麻疹病毒屬的犬瘟熱病毒(CanineDistemper Virus，CDV)感染引起的一種急性、致死性傳染病。犬瘟熱病毒的宿主范圍廣，不僅感染犬科、食肉動物和非食肉動物，而且還感染海洋哺乳動物，是危害養犬業、毛皮動物養殖業、野生動物的最重要的病原之一。犬瘟熱的典型臨床癥狀為發熱、眼角和鼻部有分泌物。對于發病的動物，臨床上很難治愈，并且代價十分昂貴，所以早期診斷顯得尤為重要。犬瘟熱病毒抗原檢測的方法較多。傳統的病毒分離方法耗時長；電鏡觀察要求條件較高；雖然免疫熒光技術適合各種病料檢測，但是敏感性較差，感染后第21天左右才能檢測到犬瘟熱病毒抗原；常規RT-PCR方法對精密設備高度依賴，尤其是熒光定量PCR儀，使其主要集中在實驗室內使用，未能幫助醫務人員真正在現場實現犬瘟熱病毒(CDV)的快速檢測。此外，由于熒光定量PCR儀的高精密性，使得整個實驗設置過程相對復雜，因此不但實驗操作，而且結果的解讀也都需要受過專業訓練的技術人員才能完成。這些缺點更讓熒光定量PCR難以在基層檢測實驗室或單位推廣，因而資源匱乏的邊遠地區則更不便于使用。

因此，現有的犬瘟熱病毒檢測手段亟待改進。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是克服背景技術的技術缺陷，提供一種基于BTNAA體系檢測犬瘟熱病毒的引物對、引物和探針組合物、試劑及試劑盒。本發明針對現有犬瘟熱病毒檢測的缺陷及市場需求，開發出一種基于BTNAA體系檢測犬瘟熱病毒的引物對、引物和探針組合物、試劑及試劑盒。本發明通過BTNAA(Body Temperature Nucleic AcidAmplification，體溫核酸擴增)一步逆轉錄等溫快速檢測犬瘟熱病毒；本發明在42℃恒溫下，通常在30min內即能得到可以用瓊脂糖凝膠電泳檢測到的擴增片段。若配合帶溫控功能的便攜式熒光檢測儀器，即可在現場對結果進行判讀。本發明相比傳統PCR法更為便捷、快速，在沒有實驗室條件的寵物店、小型寵物診所做到對犬瘟熱病毒進行便捷、快速和精確的檢測。

本發明解決上述技術問題所采用的技術方案如下：

一種基于BTNAA體系檢測犬瘟熱病毒的引物對，所述引物對包括上游引物和下游引物；所述上游引物和所述下游引物的序列分別如 SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，具體如下：

上游引物：CTGCTMGCTAAAGCRGTGACTGCTCCTGATAC；

下游引物：CAATTCTAGGCTTGTTCCCTGGGGATCGTTTG。

一種基于BTNAA體系檢測犬瘟熱病毒的引物和探針組合物，所述引物和探針組合物包括引物和探針；所述引物包括上游引物和下游引物；所述上游引物、所述下游引物和所述探針的序列分別如SEQ ID NO.1、SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示，具體如下：

上游引物：CTGCTMGCTAAAGCRGTGACTGCTCCTGATAC；

下游引物：CAATTCTAGGCTTGTTCCCTGGGGATCGTTTG；