[發(fā)明專利]含單分子標(biāo)簽的測(cè)序接頭和測(cè)序文庫(kù)的構(gòu)建方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201811483755.6 | 申請(qǐng)日： | 2018-12-06 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN109576347B | 公開(kāi)（公告）日： | 2021-03-12 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 張曉妮;許明炎;方文;屈宏越 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 深圳海普洛斯醫(yī)療器械有限公司 |
| 主分類號(hào)： | C12Q1/6806 | 分類號(hào)： | C12Q1/6806;C12N15/10;C12N15/11;C40B50/06;C40B80/00 |
| 代理公司： | 深圳舍穆專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 44398 | 代理人： | 黃賢炬 |
| 地址： | 518000 廣東省深圳市龍華區(qū)觀湖*** | 國(guó)省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 分子 標(biāo)簽 接頭 序文 構(gòu)建 方法 | ||
1.一種含單分子標(biāo)簽的測(cè)序接頭，其特征在于：
通過(guò)第一核苷酸單鏈與第二核苷酸單鏈部分結(jié)合而形成，
其中，所述第一核苷酸單鏈包括單分子標(biāo)簽和第一測(cè)序引物序列，并且
所述第二核苷酸單鏈包括樣本標(biāo)簽、以及與所述第一測(cè)序引物序列部分互補(bǔ)的第二測(cè)序引物序列。
2.如權(quán)利要求1所述的測(cè)序接頭，其特征在于：
所述測(cè)序接頭為Y字型接頭。
3.如權(quán)利要求1所述的測(cè)序接頭，其特征在于：
所述第一核苷酸單鏈還包括第一通用引物序列，并且
所述第二核苷酸單鏈還包括第二通用引物序列。
4.如權(quán)利要求1所述的測(cè)序接頭，其特征在于：
所述單分子標(biāo)簽為用于標(biāo)記不同DNA片段的隨機(jī)的堿基序列。
5.如權(quán)利要求1所述的測(cè)序接頭，其特征在于：
所述樣本標(biāo)簽為用于區(qū)別不同樣本的固定的堿基序列。
6.如權(quán)利要求1或4所述的測(cè)序接頭，其特征在于：
所述單分子標(biāo)簽的序列為SEQ ID NO:5-10。
7.如權(quán)利要求1或5所述的測(cè)序接頭，其特征在于：
所述樣本標(biāo)簽的序列為SEQ ID NO:18-23。
8.如權(quán)利要求1所述的測(cè)序接頭，其特征在于：
所述單分子標(biāo)簽的長(zhǎng)度為4bp至20bp。
9.如權(quán)利要求1所述的測(cè)序接頭，其特征在于：
所述樣本標(biāo)簽的長(zhǎng)度為4bp至20bp。
10.如權(quán)利要求1所述的測(cè)序接頭，其特征在于：
所述第二核苷酸單鏈的5’端使用磷酸基團(tuán)修飾。
11.如權(quán)利要求1所述的測(cè)序接頭，其特征在于：
所述第一核苷酸單鏈與所述第二核苷酸單鏈通過(guò)退火而部分結(jié)合。
12.如權(quán)利要求1所述的測(cè)序接頭，其特征在于：
所述第一核苷酸單鏈為5’-AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACNNNNNNNNACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATCT-3’，所述第二核苷酸單鏈為5’PHO-CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATXXXXXXXXGTCTCGTGGGCTCGG；
在所述第一核苷酸單鏈中，所述第一測(cè)序引物序列為SEQ ID NO:1，所述第一通用引物序列為SEQ ID NO:2，其中，所述單分子標(biāo)簽為NNNNNNNN；
在所述第二核苷酸單鏈中，所述第二測(cè)序引物序列為SEQ ID NO:3，所述第二通用引物序列為SEQ ID NO:4，其中，所述樣本標(biāo)簽為XXXXXXXX。
13.一種測(cè)序文庫(kù)的構(gòu)建方法，其特征在于：
包括：
(a)提取DNA；
(b)將DNA進(jìn)行片段化處理；
(c)對(duì)所獲得的DNA片段進(jìn)行末端修復(fù)和加A尾；
(d)在步驟(c)所獲得的DNA片段兩端連接含有權(quán)利要求1-12中任一項(xiàng)所述的單分子標(biāo)簽的接頭；
(e)以步驟(d)獲得的DNA接頭連接產(chǎn)物為模板，以兩端接頭的通用引物為正反向引物，進(jìn)行PCR擴(kuò)增并得到PCR產(chǎn)物；以及
(f)進(jìn)行PCR產(chǎn)物純化。
14.如權(quán)利要求11所述的測(cè)序文庫(kù)的構(gòu)建方法，其特征在于：
所述步驟(c)中，DNA片段的大小為100bp至250bp之間。
15.如權(quán)利要求11所述的測(cè)序文庫(kù)的構(gòu)建方法，其特征在于：
在步驟(f)中，利用磁珠法對(duì)所述PCR產(chǎn)物進(jìn)行純化。
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