[發明專利]一種索瑪魯肽純化專用填料及其純化方法

在審

• 申請號: 201811482820.3
• 申請日: 2018-12-05
• 公開（公告）號: CN109354622A
• 公開（公告）日: 2019-02-19
• 發明（設計）人: 戈兆松;彭凱;陳育拼;胡榮敏
• 申請（專利權）人: 蘇州匯通色譜分離純化有限公司
• 主分類號: C07K14/605
• 分類號: C07K14/605;C07K1/18;C07K1/16;C07K1/14;C07K1/34;C07K1/36
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本發明涉及一種索瑪魯肽純化專用填料及其純化方法，具體步驟為：將索瑪魯肽粗肽溶于乙腈水溶液中獲得粗肽溶液；過濾，以反相與離子交換填料以一定比例混合為固定相，濾液上樣后，以有機相和鹽相混合的流動相同時進行HPLC線性梯度洗脫，收集含有索瑪魯肽的餾分；取所述第三餾分經減壓旋蒸濃縮、冷凍干燥，即得。對于純度30％左右的索瑪魯肽一步能純化到90％以上，并且上樣量高，工業生產放大簡單，純化周期短，大大降低了企業的生產成本。

技術領域

本發明涉及填料技術領域，具體的說，是一種索瑪魯肽純化專用填料及其純化方法。

背景技術

索瑪魯肽(Semaglutide)是一種新的長效GLP-1受體激動劑，不僅具有顯著的降血糖療效，還具有明顯的減肥功效，該藥也是諾和諾德糖尿病管線中第2種兼具降糖及減肥功效的GLP-1降糖藥(另一種為利拉魯肽)。索瑪魯肽的分子式為C187H291N45O59，其對應的分子量為4111.1，從結構上看，索瑪魯肽需要將26位Lys接上AEEA、谷氨酸和十八烷酸脂肪鏈，其中，8位采用非天然氨基酸氨基異丁酸。與利拉魯肽相比，索瑪魯肽的脂肪鏈更長，疏水性增加，但是索瑪魯肽經過短鏈的AEEA修飾，親水性大大增強。AEEA修飾后不但可以與白蛋白緊密結合，掩蓋DPP-4酶水解位點，還能降低腎排泄，可延長生物半衰期，達到長循環的效果。

肽序列結構如下：

H-His7-Ala8-Glu9-Gly10-Thr11-Phe12-Thr13-Ser14-Asp15-Val16-Ser17-Ser18-Tyr19-Leu20-Glu21-Gly22-Gln23-Ala24-Ala25-Lys26(AEEA-AEEA--Glu-OctadecanedioicAcidMono-tert-butylester)-Glu27-Phe28-Ile29-Ala30-Trp31-Leu32-Val33-Arg34-Gly35-Arg36-Gly37-OH。

傳統的索瑪魯肽的固液合成法，中間體GLP-I(7-37)-OH均需要反相HPLC純化，再在液相條件下與Na-alkanoyl-Glu(ONSu)-OtBu反應，并且由于GLP-I(7-37)-OH N端未保護以及側鏈保護基全部脫除，會導致產生許多雜質，難以純化，操作繁瑣。為了保證索瑪魯肽后續的研發和生產質量，需要對其生產工藝不斷改進。因此，如何獲得更高純度的索瑪魯肽，對醫藥生產企業來說顯得尤為迫切。

索瑪魯肽的現有純化方法存在操作繁瑣，周期長，廢液多，不利于環保，成本高昂以及不利于大規模生產的缺點。在多肽純化領域，不同的純化策略對最終產品的純度、最大單一雜質含量和收率有很大影響，如何在保證純度和收率的前提下，盡可能的降低純化工藝的復雜程度、最大單一雜質以及縮短合成周期，是當下技術人員的研究重點。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術的不足，提供一種索瑪魯肽純化專用填料及其純化方法。

本發明的目的是通過以下技術方案來實現的：

一種索瑪魯肽純化專用填料及其純化方法

步驟1:取的索瑪魯肽粗肽溶于乙腈水溶液中獲得粗肽溶液,過濾；

步驟2:取所述粗肽溶液，以反相填料與離子交換填料混合為固定相，濾液上樣后，以有機相和鹽相混合的流動相同時進行HPLC線性梯度洗脫，收集含有索瑪魯肽的餾分；

步驟3:取所述第三餾分經減壓旋蒸濃縮、冷凍干燥，即得高純度索瑪魯肽。

本發明為一種索瑪魯肽純化專用填料及其純化方法，其進一步優選的技術方案如下：

(1)將索瑪魯肽粗肽溶于體積分數為50％乙腈水溶液中，得到粗肽水溶液；

(2)所得索瑪魯肽粗肽溶液用0.22微米的有機膜過濾，濾過液備用。