[發明專利]一種索瑪魯肽純化專用填料及其純化方法

在審

• 申請號: 201811482820.3
• 申請日: 2018-12-05
• 公開（公告）號: CN109354622A
• 公開（公告）日: 2019-02-19
• 發明（設計）人: 戈兆松;彭凱;陳育拼;胡榮敏
• 申請（專利權）人: 蘇州匯通色譜分離純化有限公司
• 主分類號: C07K14/605
• 分類號: C07K14/605;C07K1/18;C07K1/16;C07K1/14;C07K1/34;C07K1/36
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1.一種索瑪魯肽純化專用填料的純化方法，其特征在于，其具體步驟為：

步驟1:取的索瑪魯肽粗肽溶于乙腈水溶液中獲得粗肽溶液,過濾；

步驟2:取所述粗肽溶液，以反相填料與離子交換填料混合為固定相，濾液上樣后，以有機相和鹽相混合的流動相同時進行HPLC線性梯度洗脫，收集含有索瑪魯肽的餾分；

步驟3:取所述第三餾分經減壓旋蒸濃縮、冷凍干燥，即得高純度索瑪魯肽。

2.如權利要求1所述的一種索瑪魯肽純化專用填料的純化方法，其特征在于，

(1)將索瑪魯肽粗肽溶于體積分數為50％乙腈水溶液中，得到粗肽水溶液；

(2)所得索瑪魯肽粗肽溶液用0.22微米的有機膜過濾，濾過液備用；

(3)取所述取濾過液，以反相填料與離子交換填料混合為固定相；檢測波長為215nm進行HPLC線性洗脫，其中流動相A:100mM碳酸氫氨:乙腈的體積比為95：5，流動相B:100mM碳酸氫氨:乙腈的體積比為50：50；洗脫梯度為初始梯度5％B保留5min，然后40min至80％，收集含有索瑪魯肽的餾分；

(4)用旋轉蒸發儀旋蒸水浴溫度在30℃至35℃，真空度在-0.09Mbar以下旋去部分乙腈，得到索瑪魯肽水溶液；

(5)所得索瑪魯肽水溶液經過-50℃預凍，再進行凍干處理得到純度95％以上的索瑪魯肽樣品。

3.如權利要求1所述的一種索瑪魯肽純化專用填料的純化方法，其特征在于，所述樣品溶解索瑪魯肽粗肽溶于乙腈水溶液中，乙腈水溶液中乙腈與水的體積比為1:9至4：6之間。

4.如權利要求1所述的一種索瑪魯肽純化專用填料的純化方法，其特征在于，過濾所用濾膜為有機膜，膜的孔徑再0.1-0.5微米之間。

5.如權利要求1所述的一種索瑪魯肽純化專用填料的純化方法，其特征在于，所用固定相為反相填料與離子交換填料以一定比例混合的調料，其中反相填料與離子交換填料質量比在10:1-10:5之間；

反相填料為普通硅膠鍵合C18、C8填料以及反相聚合物填料中的一種，其粒徑在5-50微米之間；

有機相包為甲醇、乙腈、乙醇、四氫呋喃中的一種，其中鹽相包括醋酸鹽、碳酸鹽等易揮發性的鹽。

6.如權利要求1所述的一種索瑪魯肽純化專用填料的純化方法，其特征在于，線性洗脫的梯度中有機相和鹽相的洗脫體積比在95：5至50:50之間。

7.如權利要求1所述的一種索瑪魯肽純化專用填料的純化方法，其特征在于，取濾液，以反相填料與離子交換填料以一定質量比10:1至1：3混合為固定相；檢測波長為215nm進行HPLC線性洗脫，其中流動相A:100mM碳酸氫氨:乙腈的體積比為95：5，流動相B:100mM碳酸氫氨:乙腈的體積比為50：50,洗脫梯度為初始梯度5％B保留5min，然后40min至80％，收集含有索瑪魯肽的餾分。

8.如權利要求1所述的一種索瑪魯肽純化專用填料的純化方法，其特征在于，旋蒸水浴溫度在30℃至35℃，真空度在-0.09Mbar以下旋去部分乙腈，得到索瑪魯肽水溶液。

9.如權利要求1所述的一種索瑪魯肽純化專用填料的純化方法，其特征在于，所得索瑪魯肽水溶液經過-50℃預凍，再進行凍干處理得到純度90％以上的索瑪魯肽樣品。