[發明專利]一種膠原膜支架的制備方法和應用

有效

• 申請號: 201811478364.5
• 申請日: 2018-12-04
• 公開（公告）號: CN109432500B
• 公開（公告）日: 2021-05-25
• 發明（設計）人: 張偉;胡康;唐容
• 申請（專利權）人: 冠昊生物科技股份有限公司
• 主分類號: C07K14/78
• 分類號: C07K14/78;A61L27/24;A61L27/56;A61L27/58;A61L26/00;C07K1/30
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 顏希文;宋靜娜

本發明公開了一種膠原膜支架的制備方法，包括預處理、提取、去除抗原、交聯固定和凍干等步驟。采用本發明的方法制備的膠原膜支架材料經過交聯固定處理，其機械強度增強，在植入處能承受更大的受力；同時，其耐酶解性也顯著增強，延緩在體內的生物降解，其降解時間可控，可與自體組織修復、重建速度同步，更好的參與到自體組織的重建過程中；相比現有交聯技術獲得的膠原膜產品，本發明制備的膠原膜支架材料經過特有的交聯固定技術，所得膠原膜支架植入體內后，無細胞毒性反應，生物降解過程中無殘留毒性，具有很好的生物相容性。

技術領域

本發明涉及生物膜修復技術領域，尤其是一種膠原膜支架的制備方法和應用。

背景技術

目前，市場上的用于硬腦(脊)膜修復、創面修復等的膜類產品，主要有天然生物膜類和膠原海綿膜類。天然生物膜類主要來源于動物如牛、豬等的心包膜、胸膜、腹膜、小腸粘膜下層、脂網膜，天然生物膜類產品具有其原材料的致密結構和力學強度；在用于創面修復時，為了方便組織液的滲透和自體細胞、血管長入，一般需要進行打孔工藝處理；但是天然生物膜易受原材料限制導致規格難以做到很大，且厚度偏薄。

膠原海綿膜類主要來源于動物如豬、牛等富含膠原蛋白的組織(如肌腱、跟腱等組織)，經搗碎、提純、凍干等重新鋪展成型，呈多孔疏松海綿狀。膠原海綿膜類可分為交聯固定和未交聯固定類。未交聯固定類膠原海綿膜力學性能差，植入體內易被酶類降解，在修復部位停留時間過短，影響組織修復和重建。交聯固定類膠原海綿膜可以明顯增強力學性能和耐酶解性，但也存在交聯試劑殘留毒性等問題。如何更好地對膠原海綿進行交聯，且其殘留毒性不會對人體造成傷害是急需解決的技術難題。

發明內容

基于上述問題，本發明的目的在于克服上述現有技術的不足之處而提供一種膠原膜支架的制備方法，由該方法制備的膠原膜支架機械強度增強，在植入處能承受更大的受力，其耐酶解性也顯著增強，植入體內后無細胞毒性反應，生物降解過程中無殘留毒性，具有很好的生物相容性。

為實現上述目的，本發明采取的技術方案包括：

在第一個方面，本發明提供了一種膠原膜支架的制備方法，包括以下步驟：

(1)預處理：取新鮮的動物肌腱組織，洗凈、消毒并去除脂肪組織、纖維和絨毛組織；

(2)提取：將預處理后的肌腱組織搗碎成漿狀，用緩沖液浸泡以去除可溶性雜質，離心獲得沉淀，加入酸溶液中攪拌震蕩至肌腱組織溶脹，加入鹽溶液進行鹽析，收集沉淀，用去離子水透析以除去鹽離子，即得精制膠原凝膠；

(3)去除抗原：在pH值7.0～8.0條件下，用活性劑與步驟(2)所得膠原凝膠反應30～40小時，然后加入強氫鍵試劑反應30～40小時，得到徹底去除抗原后的膠原凝膠；

(4)交聯固定：將步驟(3)所得的膠原凝膠加入非醛類交聯劑溶液中，在pH值7.0～8.0、攪拌條件下，反應2～8天，然后在超聲條件下清洗膠原凝膠；

(5)凍干：將步驟(4)所得膠原凝膠冷凍干燥成型，即得所述膠原膜支架。其中，動物肌腱組織可以來自豬、牛或羊等。

優選地，所述步驟(2)全程在4℃下操作。

優選地，所述步驟(3)中活性劑為小分子有機酸酐、酰氯、酰胺、環氧化物和鹵甲烷中的至少一種。

優選地，所述步驟(3)所得去除抗原后的膠原凝膠的細胞去除率為99％以上，DNA殘留量小于20ng/mg，α-Gal抗原去除率為95～100％。

優選地，所述步驟(4)中非醛類交聯劑為環氧化物、二酰二胺、二異氰酸酯、聚乙二醇和碳化二亞胺中的至少一種。

優選地，所述非醛類交聯劑的質量濃度為1.0～4.0％。

作為本發明的另一個方面，本發明提供了上述方法制備的膠原膜支架。