[發明專利]一種半連續液體培養高效生產靈芝多糖的方法

有效

• 申請號: 201811477815.3
• 申請日: 2018-12-05
• 公開（公告）號: CN109251951B
• 公開（公告）日: 2021-12-03
• 發明（設計）人: 鄭濤
• 申請（專利權）人: 黑龍江卓健生物科技有限公司
• 主分類號: C12P19/04
• 分類號: C12P19/04;C12R1/645
• 代理公司: 北京中慧創科知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11721
• 代理人: 王馨

本發明公開了一種半連續液體培養高效生產靈芝多糖的方法，該方法的步驟包括：（1）母種的活化擴繁；（2）搖瓶菌種的制備；（3）種子液的制備；（4）一氧化氮和乙烯協同誘導處理；（5）半連續液體培養。本發明采用的半連續液體培養方法可有效延長靈芝菌絲體的對數生長期，提高靈芝液體培養生物量，提高靈芝多糖產量，與常規的分批培養方法相比，本發明工藝合理，操作簡單，可節省反復洗罐、滅菌等非發酵時間，提高了生產效率和設備利用率，降低了生產成本，可以用于大規模生產靈芝多糖，是一種很有應用前景的靈芝液體培養方法。

技術領域

本發明涉及藥用真菌生產技術領域，具體而言，涉及一種半連續液體培養高效生產靈芝多糖的方法。

背景技術

藥用真菌通常是指用于醫藥的大型真菌（蕈菌），常見種類包括冬蟲夏草、蟬花、靈芝、茯苓、豬苓、桑黃、木耳、雷丸、云芝等。這些藥用菌在我國都有上千年的應用歷史，它們雖功效不同，但最大的優點，也是它們的共同點就是無毒副作用。近代醫學研究表明，藥用真菌不僅具有傳統的益氣、強身、祛病、通經、益壽等功能，還具有增強人體免疫力，抗腫瘤抗癌的功效。因此藥用真菌是食品、保健品和藥物方面最具潛力的微生物種類之一。藥用真菌多糖是一類生物活性物質，具有廣泛的藥理活性，如抗腫瘤、免疫調節、抗感染、抗病毒、抗凝血、降血糖、抗輻射、降血脂、促進核酸與蛋白質的生物合成、控制細胞分裂和分化、調節細胞的生長與衰老等，是目前藥用真菌研究領域的一個熱點。

靈芝（Ganoderma lucidum）又稱靈芝草、神芝、芝草、仙草、瑞草，屬于擔子菌綱，多孔菌目，多孔菌科，靈芝菌屬。靈芝藥用在中國已有2000多年的歷史，被歷代醫藥家視為滋補強壯、扶正固本的神奇珍品。按本草綱目記載“靈芝性平，味苦，無毒，主胸中結，益心氣，補中，增智慧，不忘，久服輕身不老，延年神仙”。 研究表明靈芝對人體有益的成分有數千種，歸納起來主要是甾醇類、三萜類、生物堿、多糖類、氨基酸多肽類，其中靈芝多糖（Ganoderma Lucidum polysaccharides，GLP）是靈芝中主要的一類活性成分，能夠提高機體免疫力，提高機體耐缺氧能力，消除自由基，抑制腫瘤、抗輻射，提高肝臟、骨髓、血液合成DNA、RNA、蛋白質能力；靈芝多糖還具有刺激宿主非特異性抗性、免疫特異反應以及抑制移植腫瘤生理活性的特性；對心血管疾病、氣喘、過敏、神經衰弱、胃熱等有顯著效果，還具有降血壓、降血脂、降血瘀、改善血液循環、皮膚美容等作用，可廣泛應用于醫藥、保健品和化妝品行業。

我國藥用真菌資源豐富，但是由于人們對野生藥用真菌的盲目采集，使許多藥用真菌的天然資源趨于枯竭，這其中就包括靈芝，因此現在市場上的靈芝多為人工栽培。傳統上，靈芝多糖就是從人工栽培的靈芝子實體中提取。然而人工栽培由于受自然環境的影響，培養周期長、產品的質量難以控制、受地域限制等，次級代謝產物靈芝多糖的質量和產量難以控制。從生物學的觀點看，由于微生物本身的固有特點，便于實現工業化大規模生產，因此，近年來大量學者進行了液體培養產靈芝多糖的研究。與人工栽培相比，液體培養具有培養周期短、工藝簡單、原料易得、成本低等優點，因此受到研究者的廣泛關注。

目前靈芝液體培養主要采用分批培養的方式，即在一個密閉系統內（如發酵罐）投入一定量的培養基，接入少量的靈芝菌種后在適宜的條件下進行培養，使菌體生長繁殖，積累代謝產物，完成一個生長周期。而提高靈芝多糖產量的方法主要是在此基礎上優化發酵條件以及培養基。但是分批培養也存在一些缺點，例如每批培養都需要進行裝料、滅菌、接種、放料、清洗等操作，工序繁瑣，耗費的人力、物力較大，整體上來說生產連續性不強，生產效率較低。在分批培養的后期，由于培養基的營養成分大量消耗，無法滿足菌體的生長，存在著多糖類代謝產物消耗現象，因此很難進一步提高多糖產量。