[發明專利]核素125I標記雙調控溶瘤腺病毒的方法及其對前列腺癌靶向治療的實驗研究方法

在審

• 申請號: 201811476838.2
• 申請日: 2018-12-04
• 公開（公告）號: CN109706175A
• 公開（公告）日: 2019-05-03
• 發明（設計）人: 韓從輝;郝林;史振鐸;韓曉曉
• 申請（專利權）人: 徐州市中心醫院
• 主分類號: C12N15/861
• 分類號: C12N15/861;C12N5/10;C12Q1/02
• 代理公司: 南京正聯知識產權代理有限公司 32243
• 代理人: 王素琴

本發明提供一種核素¹²⁵I標記雙調控溶瘤腺病毒的方法及其對前列腺癌靶向治療的實驗研究方法，通過前列腺特異性抗原PSA啟動子的克隆與鑒定；hTERT/PSA雙調控增殖腺病毒載體RSOAds－hTERT/PSA的構建及鑒定；核素¹²⁵I標記hTERT/PSA雙調控增殖型溶瘤腺病毒構建¹²⁵I－RSOAds－hTERT/PSA核素?溶瘤病毒標記物；¹²⁵I－RSOAds－hTERT/PSA體外對激素非依賴性前列腺癌細胞的轉染效率、腫瘤殺傷效應檢測；¹²⁵I－RSOAds－hTERT/PSA靶向治療前列腺癌抑瘤效應、瘤微環境改變觀察。本發明能夠實現準確的影響分析，通過較全面的實驗方法，進而實現對核素¹²⁵I標記PSA/hTERT啟動子雙調控溶瘤腺病毒對前列腺癌靶向治療及瘤微環境影響的檢測分析，保證了結果的準確性與可靠性。

技術領域

本發明涉及一種核素¹²⁵I標記雙調控溶瘤腺病毒的方法及其對前列腺癌靶向治療的實驗研究方法。

背景技術

前列腺癌是指發生在前列腺的上皮性惡性腫瘤。2004年WHO《泌尿系統及男性生殖器官腫瘤病理學和遺傳學》中前列腺癌病理類型上包括腺癌(腺泡腺癌)、導管腺癌、尿路上皮癌、鱗狀細胞癌、腺鱗癌。其中前列腺腺癌占95％以上，因此，通常所說的前列腺癌就是指前列腺腺癌。2012年我國腫瘤登記地區前列腺癌發病率為9.92/10萬，列男性惡性腫瘤發病率的第6位。

前列腺癌的研究是目前研究的重要課題之一，目前尚缺乏核素¹²⁵I標記 PSA/hTERT啟動子雙調控溶瘤腺病毒對前列腺癌靶向治療及瘤微環境影響的準確研究。核素¹²⁵I標記PSA/hTERT啟動子雙調控溶瘤腺病毒的方法，該方法國內外鮮有報道。

發明內容

本發明的目的是提供一種核素¹²⁵I標記雙調控溶瘤腺病毒的方法及其對前列腺癌靶向治療的實驗研究方法解決現有技術中存在如何進行核素¹²⁵I標記 PSA/hTERT啟動子雙調控溶瘤腺病毒對前列腺癌靶向治療及瘤微環境影響的準確研究的問題。

本發明的技術解決方案是：

一種核素¹²⁵I標記雙調控溶瘤腺病毒的方法及其對前列腺癌靶向治療的實驗研究方法，其特征在于：包括以下步驟，

S1、前列腺特異性抗原PSA啟動子的克隆與鑒定；

S2、hTERT/PSA雙調控增殖腺病毒載體RSOAds－hTERT/PSA的構建及鑒定；

S3、核素¹²⁵I標記hTERT/PSA雙調控增殖型溶瘤腺病毒構建¹²⁵I－RSOAds －hTERT/PSA核素-溶瘤病毒標記物；

S4、¹²⁵I－RSOAds－hTERT/PSA體外對激素非依賴性前列腺癌細胞的轉染效率、腫瘤殺傷效應檢測；

S5、¹²⁵I－RSOAds－hTERT/PSA靶向治療前列腺癌抑瘤效應、瘤微環境改變觀察。

進一步地，步驟S1具體為，

S11、前列腺特異性啟動子的基因PCR克隆與鑒定：根據美國NCBI Nucleotide獲得的序列(U37672.1)，設計擴增PSA啟動子引物，并分別引入 NotI和SpeI酶切位點；從前列腺癌組織中提取基因組DNA，并以此為模板行 PCR擴增出522bp大小PSA啟動子片段；用EcoR V酶切pUC57質粒，將目的基因的PCR產物與pUC57載體酶切產物進行連接，篩選克隆，提取質粒并測序確認插入產物；將鑒定正確的質粒命名為pUC57-PSAp；