[發明專利]一種利用黑曲霉分離提取5,5＇-氧代二(亞甲基)二呋喃-2-甲醛的方法

有效

• 申請號: 201811474684.3
• 申請日: 2018-12-04
• 公開（公告）號: CN110004193B
• 公開（公告）日: 2022-09-20
• 發明（設計）人: 李祝;陳雪;代園鳳;唐婧紅;冉江;張素;張欽語;楊佩斯
• 申請（專利權）人: 貴州大學;貴州省煙草公司畢節市公司
• 主分類號: C12P17/04
• 分類號: C12P17/04;C07D307/46;C07D307/58;C12R1/685
• 代理公司: 貴陽東圣專利商標事務有限公司 52002
• 代理人: 袁慶云

本發明公開了一種利用黑曲霉分離提取5,5＇?氧代二(亞甲基)二呋喃?2?甲醛的方法，包括：取黑曲霉發酵菌絲體于電熱恒溫干燥箱中，45?60℃烘干粉碎成菌粉，稱取菌粉8?10g，用菌粉與50mL丙酮在60℃水浴鍋中回流3?4h，然后用紗布過濾開殘渣得到提取液，再用同樣的方法進行2次回流提取，收集三次總提取液，并將該提取液用旋轉蒸發儀在溫度40?60℃、壓力為0.04?0.06MPa的條件下旋蒸至丙酮揮干，得濃縮液；硅膠柱層析、反向柱層析、羥丙基葡聚糖凝膠柱層析、再次柱層析，并用環己烷：丙酮=30:1進行洗脫，洗脫液濃縮干燥得白色粉末。本發明生產成本低，操作簡單，重復性好，溶劑殘留少且易回收，減少了能源的消耗和廢氣的排放，大大降低了環境污染。

技術領域

本發明涉及化工技術領域，特別是涉及一種利用黑曲霉分離提取5,5＇-氧代二(亞甲基)二呋喃-2-甲醛的方法。

背景技術

黑曲霉是曲霉屬黑曲霉群霉菌, 為低等真核生物。菌絲體由具有橫隔的分支菌絲構成, 菌叢黑褐色, 頂囊球形, 小梗雙層, 分生孢子球形, 平滑或粗糙。黑曲霉是集安全和具有許多活性強大酶系等諸多優點于一身的優良工業發酵用菌種。在發酵工業中地位不凡, 應用非常廣泛。黑曲霉是FDA認證的安全菌種, 利用黑曲霉生產的酶制劑不僅安全、可靠, 而且生長比較快、發酵周期也較短, 具有非常明顯的優越性。

5,5＇-氧代二(亞甲基)二呋喃-2-甲醛是合成幾種常用冠醚和化合物的中間體。文獻報導的5,5＇-氧代二(亞甲基)二呋喃-2-甲醛制備主要是通過熱化學分解5-HFM得到和由5-HFM的酸催化脫水反應得到。沒有相關文獻報道從黑曲霉中分離提取5,5＇-氧代二(亞甲基)二呋喃-2-甲醛。

發明內容

本發明的目的在于克服上述缺點而提供的一種生產成本低，操作簡單，重復性好，溶劑殘留少且易回收，減少了能源的消耗和廢氣的排放，大大降低了環境污染的利用黑曲霉分離提取5,5＇-氧代二(亞甲基)二呋喃-2-甲醛的方法。

本發明的一種利用黑曲霉分離提取5,5＇-氧代二(亞甲基)二呋喃-2-甲醛的方法，包括以下步驟：

（1）濃縮液的制備

取黑曲霉發酵菌絲體于電熱恒溫干燥箱中，45-60℃烘干粉碎成菌粉，稱取菌粉8-10g，用菌粉與50mL丙酮在60℃水浴鍋中回流3-4h，然后用紗布過濾開殘渣得到提取液，再用同樣的方法進行 2次回流提取，收集三次總提取液，并將該提取液用旋轉蒸發儀在溫度40-60℃、壓力為0.04-0.06MPa的條件下旋蒸至丙酮揮干，得濃縮液；

（2）硅膠柱層析

用石油醚濕法裝柱得到硅膠層析柱，將步驟（1）得到的濃縮液用80mL的丙酮溶解并與200-300目硅膠拌樣，揮干溶劑后干法上樣；用石油醚：丙酮=1:0、50:1、20:1、10:1、5:1、2:1、1:1、0:1進行梯度洗脫，分段收集洗脫液，薄層層析跟蹤檢測，合并相同組分，用旋轉蒸發儀在溫度40-60℃、壓力為0.04-0.06MPa的條件下旋蒸至丙酮揮干，得濃縮組分；

（3）反向柱層析

取步驟（2）制得的濃縮組分用80mL丙酮溶解后與200-300目硅膠拌樣，揮干溶劑后濕法上反向硅膠柱，并用純凈水：甲醇=100：0、90:10、80:20、70:30、60:40、50:50、40:60、30:70、20:80、10:90、0:100進行梯度洗脫，分段收集洗脫液，薄層層析跟蹤檢測，合并相同組分，用旋轉蒸發儀在溫度40-60℃、壓力為0.04-0.06MPa的條件下旋蒸至丙酮揮干，得濃縮液；

（4）羥丙基葡聚糖凝膠柱層析