[發(fā)明專利]一種利用黑曲霉分離提取5,5＇-氧代二(亞甲基)二呋喃-2-甲醛的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811474684.3
• 申請日: 2018-12-04
• 公開（公告）號: CN110004193B
• 公開（公告）日: 2022-09-20
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李祝;陳雪;代園鳳;唐婧紅;冉江;張素;張欽語;楊佩斯
• 申請（專利權(quán)）人: 貴州大學(xué);貴州省煙草公司畢節(jié)市公司
• 主分類號: C12P17/04
• 分類號: C12P17/04;C07D307/46;C07D307/58;C12R1/685
• 代理公司: 貴陽東圣專利商標事務(wù)有限公司 52002
• 代理人: 袁慶云

1.一種利用黑曲霉分離提取5,5＇-氧代二(亞甲基)二呋喃-2-甲醛的方法，包括以下步驟：

（1）濃縮液的制備

取黑曲霉發(fā)酵菌絲體于電熱恒溫干燥箱中，45-60℃烘干粉碎成菌粉，稱取菌粉8-10g，用菌粉與50mL丙酮在60℃水浴鍋中回流3-4h，然后用紗布過濾開殘渣得到提取液，再用同樣的方法進行 2次回流提取，收集三次總提取液，并將該提取液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在溫度40-60℃、壓力為0.04-0.06MPa的條件下旋蒸至丙酮揮干，得濃縮液；

（2）硅膠柱層析

用石油醚濕法裝柱得到硅膠層析柱，將步驟（1）得到的濃縮液用80mL的丙酮溶解并與200-300目硅膠拌樣，揮干溶劑后干法上樣；用石油醚：丙酮=1:0、50:1、20:1、10:1、5:1、2:1、1:1、0:1進行梯度洗脫，分段收集洗脫液，薄層層析跟蹤檢測，合并相同組分，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在溫度40-60℃、壓力為0.04-0.06MPa的條件下旋蒸至丙酮揮干，得濃縮組分；

（3）反向柱層析

取步驟（2）制得的濃縮組分用80mL丙酮溶解后與200-300目硅膠拌樣，揮干溶劑后濕法上反向硅膠柱，并用純凈水：甲醇=100：0、90:10、80:20、70:30、60:40、50:50、40:60、30:70、20:80、10:90、0:100進行梯度洗脫，分段收集洗脫液，薄層層析跟蹤檢測，合并相同組分，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在溫度40-60℃、壓力為0.04-0.06MPa的條件下旋蒸至丙酮揮干，得濃縮液；

（4）羥丙基葡聚糖凝膠柱層析

將羥丙基葡聚糖凝膠和氯仿：甲醇 =1:1 混懸得羥丙基葡聚糖凝膠柱，將步驟（3）制得的濃縮液用30mL甲醇溶解后上樣，并用氯仿：甲醇 =1:1在重力下自然洗脫，分段收集洗脫液，薄層層析跟蹤檢測，合并相同組分，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在溫度40-60℃、壓力為0.04-0.06MPa的條件下旋蒸至有機溶劑揮干，得濃縮液；

（5）再次柱層析

將步驟（4）得到的濃縮液再次進行柱層析，并用環(huán)己烷：丙酮=30:1進行洗脫，洗脫液濃縮干燥得白色粉末，即為5,5＇-氧代二(亞甲基)二呋喃-2-甲醛類成分；

其中：所述的黑曲霉是黑曲霉xj，保藏號為：CCTCC NO：M 206021。