[發明專利]胚胎染色方法、判斷胚胎發育能力的方法及試劑盒

在審

• 申請號: 201811473357.6
• 申請日: 2018-12-04
• 公開（公告）號: CN109609583A
• 公開（公告）日: 2019-04-12
• 發明（設計）人: 郭勇;倪和民;齊曉龍;蔡德霖;王相國;盛熙暉;刑凱
• 申請（專利權）人: 北京農學院
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02
• 代理公司: 北京匯知杰知識產權代理事務所(普通合伙) 11587
• 代理人: 楊巍;蔡倫

本發明屬于胚胎發育領域。更具體地，本發明提供了一種胚胎染色方法、一種判斷胚胎發育能力的方法、以及用于實施所述兩種方法的試劑盒。本發明方法可以簡單且準確地判斷胚胎發育能力，并且經歷過本發明方法的胚胎依然能夠繼續發育，例如繼續發育至孵化狀態。

技術領域

本發明屬于胚胎發育領域。更具體地，本發明涉及一種胚胎染色方法、一種判斷胚胎發育能力的方法、及用于執行所述方法的試劑盒。

背景技術

當前存在著諸多的可以用于鑒別或評估胚胎質量的方法，但是這些方法各自存在著各自固有的缺陷。目前被廣泛使用的形態鑒別能夠無損地鑒別胚胎質量，并且能夠在一定程度上預測胚胎移植后的妊娠率。但是這種方法主觀性強，有時會出現評估后鑒定為質量好的囊胚而妊娠失敗的情況，鑒定后認為質量差的囊胚反而能夠妊娠。

染色排斥試驗、酶活性試驗、葡萄糖吸收量檢測、以及死細胞和活細胞檢測也能夠用于鑒別或評估胚胎質量，但是這些方法會對胚胎造成傷害，且不能用于單個胚胎的檢測。

一些特殊染色方法和技術也成功應用于組織學研究，例如可以使用免疫熒光染色法來進行胚胎體外染色，由此來對胚胎發育進行判斷。但此方法需要先將胚胎固定，而固定后的胚胎中的細胞已經死亡并停止發育，并且該方法只能允許觀察到胚胎某一個發育階段的形態。

綜上所述，亟需找到一種能夠客觀、準確地判斷胚胎發育能力的方法，且經歷該方法的胚胎后續依然能夠繼續發育。建立這樣的方法，可解決構建判斷胚胎體外發育狀況的模型，為研究人或動物體外輔助生殖技術、胚胎質量鑒定提供良好的試驗平臺。

發明內容

如上所述，本領域已經開發出成熟的胚胎體外免疫熒光染色體系，但是該體系需要對胚胎進行固定等處理，所以不能夠保證染色后胚胎依然存活。

為解決該技術問題，本發明人經過反復的研究，意外地發現，可以用活細胞染色劑和死細胞染色劑對胚胎進行染色，而不會影響胚胎發育；本發明人進一步發現，在對上述染色胚胎進行照相之后，可以根據從照片中獲得的死細胞比率準確地判斷胚胎的后續發育能力，藉此完成了本發明。

因此，在第一方面，本發明提供了一種胚胎染色方法，包括以下步驟：a)采用活細胞染色劑對胚胎進行活細胞染色；并b)采用死細胞染色劑對該胚胎進行死細胞染色。

在第二方面，本發明提供了一種判斷胚胎發育能力的方法，包括以下步驟：a)實施本發明第一方面的胚胎染色方法；b)用激發光照射經染色的胚胎，并拍攝圖像，然后根據獲得的圖像計算胚胎死細胞比率；并且c)如果在步驟b)中獲得的胚胎死細胞比率在一個閾值以下，則判斷該胚胎能夠繼續發育，如果在步驟b)中獲得的胚胎死細胞比率高于該閾值，則判斷該胚胎不能繼續發育。

在第三方面，本發明提供了一種用于實施本發明第一方面或第二方面的方法的試劑盒，包括：活細胞染色劑、死細胞染色劑、以及用于指導如何實施本發明第一方面的胚胎染色方法的說明書或者用于指導如何實施本發明第二方面的判斷胚胎發育能力的方法的說明書。

通過采用本發明的方法和/或試劑盒，可以對胚胎進行染色和鑒定，并且鑒定為發育狀況良好的大腔囊胚后續能夠繼續發育到孵化狀態。因此，本發明的方法為深入研究胚胎體外質量鑒別提供良好的試驗工作平臺。

附圖說明

圖1為示出染色前的小鼠囊胚的照片(10×)；

圖2為示出FDA/PI雙染后的小鼠囊胚的照片(10×)；

圖3為示出染色后繼續發育至孵化狀態的小鼠囊胚的照片(10×)。

具體實施方式