[發(fā)明專利]使用血清中卵泡抑素樣蛋白-1輔助評估早期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的研究方法

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• 申請日: 2018-12-04
• 公開（公告）號: CN109633145A
• 公開（公告）日: 2019-04-16
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王禹基;倪蘇;李辰凱
• 申請（專利權(quán)）人: 常州市第二人民醫(yī)院
• 主分類號: G01N33/535
• 分類號: G01N33/535;G01N33/543
• 代理公司: 北京盛凡智榮知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11616
• 代理人: 王翠

本發(fā)明提供了一種使用血清中卵泡抑素樣蛋白?1輔助評估早期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的研究方法，包括：(1)使用非抗凝管靜脈抽取早期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的血液3?4毫升，自然凝結(jié)分離出血漿；(2)利用ELISA試劑盒檢測其中FSTL1蛋白的表達(dá)水平；(3)將檢測到的FSTL1蛋白的表達(dá)數(shù)據(jù)與正常人的FSTL1表達(dá)范圍作對比。本發(fā)明通過研究，可以將血清中卵泡抑素樣蛋白?1應(yīng)用在診斷早期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎中，將血清中卵泡抑素樣蛋白?1的濃度作為一個(gè)診斷的指標(biāo)，穩(wěn)定性好，且對比明顯，可以及早診斷類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎，有利于控制病情發(fā)展及治療。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種使用血清中卵泡抑素樣蛋白-1輔助評估早期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的研究方法。

背景技術(shù)

類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎是現(xiàn)在困擾很多人的疾病，給很多患者帶來了長久的痛苦，因?yàn)轭愶L(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病因未明，且是一種慢性的疾病。類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎可能會對腎臟、內(nèi)臟、呼吸系統(tǒng)等造成危害，還可能造成關(guān)節(jié)畸形，因此，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎越早發(fā)現(xiàn)越好，便于治療。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種使用血清中卵泡抑素樣蛋白-1輔助評估早期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的研究方法。

本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的：

一種使用血清中卵泡抑素樣蛋白-1輔助評估早期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的研究方法，包括：

(1)使用非抗凝管靜脈抽取早期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的血液3-4毫升，自然凝結(jié)分離出血漿；

(2)利用ELISA試劑盒檢測其中FSTL1蛋白的表達(dá)水平；

(3)將檢測到的FSTL1蛋白的表達(dá)數(shù)據(jù)與正常人的FSTL1表達(dá)范圍作對比。

上述方法中，所述步驟(2)具體包括：

(2.1)檢測前一晚包被96孔板用于ELISA，用PBS緩沖液將捕獲抗體稀釋至工作濃度，按照每孔100μL加入96孔板中，用封板膜封閉后室溫過夜；

(2.2)檢測當(dāng)天先將孔中的液體吸除，進(jìn)行板清洗；最后在每孔中加入300μL的試劑稀釋液，室溫封閉至少1個(gè)小時(shí)，重復(fù)一遍之前的板清洗步驟；

(2.3)提前將樣品從-80℃冰箱取出，冰上溶解，然后按照說明書梯度稀釋試劑盒內(nèi)附帶的人FSTL1標(biāo)準(zhǔn)品蛋白，于15分鐘內(nèi)將100μL的標(biāo)準(zhǔn)品及檢測樣品依次加入之前包被好的96孔中，用封板膜封閉后室溫孵育2小時(shí)；

(2.4)先將孔中的液體吸除，然后進(jìn)行板清洗；每孔加入100μL稀釋好的檢測抗體，用封板膜封閉后室溫孵育2小時(shí)；

(2.5)先將孔中的液體吸除，然后進(jìn)行板清洗；每孔加入100μLHRP藕聯(lián)的鏈霉親和素溶液，避光孵育20分鐘；

(2.6)先將孔中的液體吸除，然后進(jìn)行板清洗；每孔加入100μL的顯色底物溶液，避光孵育20分鐘；每孔加入50μL的終止溶液，輕拍96孔板混合均勻；立即使用微板光度計(jì)于450nm處讀取吸光度值，進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，得到FSTL1蛋白的表達(dá)數(shù)據(jù)。

上述方法中，步驟(2.2)、步驟(2.4)、(2.5)、(2.6)中，進(jìn)行孔板清洗的方法為：每孔加入400μL清洗緩沖液清洗3遍，每一遍都用吸引器將孔中的清洗緩沖液吸干或者在紙巾上拍干。

血清中卵泡抑素樣蛋白-1在早期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎診斷中的應(yīng)用，其中，將血清中卵泡抑素樣蛋白-1作為診斷早期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的生物標(biāo)記物，早期類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者血清中的卵泡抑素樣蛋白-1的濃度高于正常范圍。

綜上所述，由于采用了上述技術(shù)方案，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，有以下優(yōu)點(diǎn)：