[發明專利]使用血清中卵泡抑素樣蛋白-1輔助評估早期類風濕關節炎的研究方法在審
| 申請號： | 201811472904.9 | 申請日： | 2018-12-04 |
| 公開（公告）號： | CN109633145A | 公開（公告）日： | 2019-04-16 |
| 發明（設計）人： | 王禹基;倪蘇;李辰凱 | 申請（專利權）人： | 常州市第二人民醫院 |
| 主分類號： | G01N33/535 | 分類號： | G01N33/535;G01N33/543 |
| 代理公司： | 北京盛凡智榮知識產權代理有限公司 11616 | 代理人： | 王翠 |
| 地址： | 213000 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 類風濕關節炎 蛋白 卵泡抑素 血清 診斷 表達數據 表達水平 病情發展 檢測 評估 抗凝 血漿 靜脈 研究 抽取 凝結 血液 治療 應用 | ||
1.一種使用血清中卵泡抑素樣蛋白-1輔助評估早期類風濕關節炎的研究方法，其特征在于，包括：
(1)使用非抗凝管靜脈抽取早期類風濕關節炎患者的血液3-4毫升，自然凝結分離出血漿；
(2)利用ELISA試劑盒檢測其中FSTL1蛋白的表達水平；
(3)將檢測到的FSTL1蛋白的表達數據與正常人的FSTL1表達范圍作對比。
2.根據權利要求1所述的使用血清中卵泡抑素樣蛋白-1輔助評估早期類風濕關節炎的研究方法，其特征在于，所述步驟(2)具體包括：
(2.1)檢測前一晚包被96孔板用于ELISA，用PBS緩沖液將捕獲抗體稀釋至工作濃度，按照每孔100μL加入96孔板中，用封板膜封閉后室溫過夜；
(2.2)檢測當天先將孔中的液體吸除，進行板清洗；最后在每孔中加入300μL的試劑稀釋液，室溫封閉至少1個小時，重復一遍之前的板清洗步驟；
(2.3)提前將樣品從-80℃冰箱取出，冰上溶解，然后按照說明書梯度稀釋試劑盒內附帶的人FSTL1標準品蛋白，于15分鐘內將100μL的標準品及檢測樣品依次加入之前包被好的96孔中，用封板膜封閉后室溫孵育2小時；
(2.4)先將孔中的液體吸除，然后進行板清洗；每孔加入100μL稀釋好的檢測抗體，用封板膜封閉后室溫孵育2小時；
(2.5)先將孔中的液體吸除，然后進行板清洗；每孔加入100μLHRP藕聯的鏈霉親和素溶液，避光孵育20分鐘；
(2.6)先將孔中的液體吸除，然后進行板清洗；每孔加入100μL的顯色底物溶液，避光孵育20分鐘；每孔加入50μL的終止溶液，輕拍96孔板混合均勻；立即使用微板光度計于450nm處讀取吸光度值，進行數據分析，得到FSTL1蛋白的表達數據。
3.根據權利要求2所述的使用血清中卵泡抑素樣蛋白-1輔助評估早期類風濕關節炎的研究方法，其特征在于，步驟(2.2)、步驟(2.4)、(2.5)、(2.6)中，進行孔板清洗的方法為：每孔加入400μL清洗緩沖液清洗3遍，每一遍都用吸引器將孔中的清洗緩沖液吸干或者在紙巾上拍干。
4.血清中卵泡抑素樣蛋白-1在早期類風濕關節炎診斷中的應用，其特征在于，將血清中卵泡抑素樣蛋白-1作為診斷早期類風濕關節炎的生物標記物，早期類風濕關節炎患者血清中的卵泡抑素樣蛋白-1的濃度高于正常范圍。
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