[發明專利]檢測血清中的不飽和鐵結合力的試劑盒及方法

在審

• 申請號: 201811468609.6
• 申請日: 2018-12-03
• 公開（公告）號: CN111257549A
• 公開（公告）日: 2020-06-09
• 發明（設計）人: 陳芳;王嘉鵬;張裕平
• 申請（專利權）人: 深圳邁瑞生物醫療電子股份有限公司
• 主分類號: G01N33/52
• 分類號: G01N33/52
• 代理公司: 北京派特恩知識產權代理有限公司 11270
• 代理人: 王姍姍;張穎玲

本發明公開了一種檢測血清中的不飽和鐵結合力的試劑盒及方法。所述檢測血清中的不飽和鐵結合力的試劑盒包括第一試劑和第二試劑，其中，所述第一試劑包括pH值為7.5～9.0的緩沖液、還原劑、亞鐵離子以及能與亞鐵離子螯合的螯合劑；和所述第二試劑包括緩沖液以及能與亞鐵離子絡合而顯色的發色試劑。按照本發明能夠使得亞鐵離子或鐵離子在堿性條件下更加穩定并且能夠盡可能減少檢測設備中的交叉污染。

技術領域

本申請涉及體外檢測領域，特別是涉及血清中的不飽和鐵結合力的檢測。

背景技術

鐵是血紅素的必需元素，血紅素是合成血紅蛋白和肌紅蛋白的原料，也是促進B族維生素代謝必不可少的物質。血清中的鐵離子全部與轉鐵蛋白結合，是鐵離子的運輸形式，稱為血清鐵(Fe)。通常血清中的轉鐵蛋白相對于鐵離子是過量的，其中約有三分之一的轉鐵蛋白會被血清鐵結合，而未被血清鐵結合的轉鐵蛋白的量用不飽和鐵結合力(UIBC)表示。不飽和鐵結合力是指血清中為被血清鐵飽和的轉鐵蛋白能夠結合的鐵離子的量。血清中所有轉鐵蛋白能結合的最大鐵離子的量稱為總鐵結合力(TIBC)，它等于血清鐵與不飽和鐵結合力之和。血清鐵、不飽和鐵結合力、總鐵結合力的檢測可用于輔助臨床疾病診斷。例如，血清鐵增高時常見于溶血性貧血、再生障礙性貧血、巨紅細胞性貧血等；血清鐵降低見于缺鐵性貧血、慢性長期失血、惡性腫瘤等；總鐵結合力升高見于缺鐵性貧血、急性肝炎等；總鐵結合力降低見于肝硬化、腎病、尿毒癥和血色素沉著癥等。因此，血清鐵、不飽和鐵結合力、總鐵結合力的測定具有重要的臨床意義。

目前，測定不飽和鐵結合力的方法中應用較為廣泛的是比色法，可應用于全自動化生化儀上，進行大批量臨床樣本的檢測。

轉鐵蛋白與鐵離子是可逆結合的，在酸性條件鐵離子從轉鐵蛋白上解離下來，在堿性條件下鐵離子則與轉鐵蛋白結合。因此，比色法測定不飽和鐵結合力的原理是在pH大于7.5的堿性條件下，用標準濃度的鐵離子溶液飽和樣本中的轉鐵蛋白后，檢測剩下的游離鐵離子濃度，用加入的鐵離子的量減去游離的(即過量的)鐵離子的量即可得到不飽和鐵結合力。為了測定游離的(即過量的)鐵離子的量，需要加入還原劑使得鐵離子還原成亞鐵離子，再用能與亞鐵離子絡合的發色試劑去絡合亞鐵離子，在特定檢測波長下進行比色測定。

根據不飽和鐵結合力的檢測原理，過量且定量的亞鐵離子在pH大于7.5的緩沖液中與發色試劑反應。該反應在堿性條件下進行，而亞鐵離子在堿性條件下不穩定。另外，在自動生化儀中測定不飽和鐵結合力的過程中，在自動生化儀的反應杯、試劑針、攪拌桿等部件上可能殘留亞鐵離子，特別是在檢測完畢后用堿性清洗劑清洗自動生化分析儀之后，亞鐵離子殘留問題更為顯著，導致下次使用該反應杯、試劑針、攪拌桿等部件時因為殘留的亞鐵離子而存在交叉污染。這樣的交叉污染包括對不飽和鐵結合力檢測的污染，也包括對其他生化試劑項目的污染。

發明內容

本發明的目的在于提供一種檢測血清中的不飽和鐵結合力的試劑盒和方法，本發明能夠使用于檢測不飽和鐵結合力的亞鐵離子或鐵離子在堿性條件下更加穩定并且顯著減少、甚至避免對檢測裝置，例如自動生化儀造成的交叉污染。

為此，本發明的第一方面提供一種檢測血清中的不飽和鐵結合力的試劑盒，所述試劑盒包括第一試劑和第二試劑，所述第一試劑包括pH值為7.5～9.0的緩沖液、還原劑、亞鐵離子以及能與亞鐵離子螯合的螯合劑，所述第二試劑包括緩沖液、尤其是pH值為7.5～9.0的緩沖液以及能與亞鐵離子絡合而顯色的發色試劑。

本發明通過在第一試劑中加入一定濃度的既能與亞鐵離子結合、又不干擾亞鐵離子與轉鐵蛋白的結合且不干擾亞鐵離子與發色試劑的反應的螯合劑，使得未與轉鐵蛋白或發色試劑結合的亞鐵離子在堿性條件下呈被螯合的狀態，不與氫氧根離子結合生成沉淀，從而亞鐵離子在堿性條件下更加穩定。此外，如果在自動生化儀的反應杯、試劑針、攪拌桿等部件中殘留有亞鐵離子，則殘留的亞鐵離子由于與螯合劑結合而更容易被清洗，從而避免產生交叉污染。