[發明專利]一種基因工程釀酒酵母及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201811465766.1
• 申請日: 2018-12-03
• 公開（公告）號: CN109536397B
• 公開（公告）日: 2021-11-05
• 發明（設計）人: 許建韌;劉晨光;趙心清;白鳳武
• 申請（專利權）人: 上海交通大學
• 主分類號: C12N1/19
• 分類號: C12N1/19;C12N15/90;C12P7/06;C12R1/865
• 代理公司: 上海旭誠知識產權代理有限公司 31220
• 代理人: 鄭立

1.一種基因工程釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，其特征在于，YCR049C基因被失活。

2.如權利要求1所述的基因工程釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，其特征在于，所述YCR049C基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示或所述YCR049C基因的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

3.如權利要求2所述的基因工程釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，其特征在于，改造出發菌株為釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiaee)S288c。

4.如權利要求1所述的基因工程釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)，其特征在于，所述基因工程釀酒酵母為釀酒酵母M8-KO049，保藏號為CGMCC NO.16628，于2018年10月24日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心。

5.一種提高釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)乙醇耐受性的方法，其特征在于，將釀酒酵母中的YCR049C基因失活；其中，所述YCR049C基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:1所示或所述YCR049C基因的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

6.一種如權利要求1所述的基因工程釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的制備方法，其特征在于，通過同源重組的方法敲除YCR049C基因。

7.如權利要求6所述的制備方法，包括：步驟1)構建YCR049C敲除組件；步驟2)將YCR049C敲除組件電擊轉化釀酒酵母；步驟3)篩選陽性克隆及鑒定。

8.如權利要求7所述的制備方法，其特征在于，YCR049C敲除組件的構建方法為：利用PCR方法，在KanMX4融合性篩選標記的5’和3’兩端分別連接模式酵母S288c的YCR049C的5’和3’兩端部分同源序列；PCR上游引物序列如SEQ ID No:3所示，PCR下游引物序列如SEQ IDNo:4所示。

9.一種如權利要求1所述的基因工程釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)在乙醇發酵生產中的應用。

10.如權利要求9所述的應用，其特征在于，所述乙醇發酵生產為葡萄糖批次發酵，所述葡萄糖的初始濃度大于250g/L。