[發(fā)明專利]正十六烷基磷酸膽堿的制備方法及其作為疫苗免疫佐劑的應(yīng)用

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811465132.6
• 申請日: 2018-12-03
• 公開（公告）號: CN109517008A
• 公開（公告）日: 2019-03-26
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉宗華;薛巍;袁洪媛;李莎
• 申請（專利權(quán)）人: 暨南大學(xué)
• 主分類號: C07F9/11
• 分類號: C07F9/11;A61K39/39;A61P35/00
• 代理公司: 廣州市華學(xué)知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 44245
• 代理人: 劉瑜

本發(fā)明公開了一種正十六烷基磷酸膽堿的制備方法及其作為疫苗免疫佐劑的應(yīng)用。該正十六烷基磷酸膽堿的結(jié)構(gòu)式如式I所示。本發(fā)明中的通過采用磷酸膽堿基團用十六烷基鏈進行疏水改性，制備細(xì)胞膜粘附分子正十六烷基膽堿磷酸鹽，它可通過靜電吸附和疏水相互作用粘附在細(xì)胞膜上，因此，可將正十六烷基膽堿磷酸鹽作為疫苗免疫佐劑，其能夠引發(fā)顯著更高的抗原特異性體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答。本發(fā)明中制得的正十六烷基磷酸膽堿結(jié)合了磷酸膽堿CP和十六烷基鏈反應(yīng)的優(yōu)點，具有細(xì)胞黏附性，疏水性和生物安全性，可將其作為有效的疫苗遞送系統(tǒng)，用于誘導(dǎo)有效的抗腫瘤免疫應(yīng)答和抗癌癥疾病。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)用材料領(lǐng)域，特別涉及一種正十六烷基磷酸膽堿的制備方法及其作為疫苗免疫佐劑的應(yīng)用。

背景技術(shù)

近幾年，癌癥免疫治療作為一個新一代癌癥治療策略已經(jīng)顯示出巨大的潛力，并引起越來越多的關(guān)注。然而，如果單獨使用腫瘤相關(guān)抗原，則不能誘導(dǎo)有效的免疫應(yīng)答。因此，有效的腫瘤治療需要免疫佐劑的幫助以引發(fā)強烈的抗腫瘤免疫應(yīng)答。

眾所周知，免疫在預(yù)防嚴(yán)重傳染疾病方面發(fā)揮了關(guān)鍵性的作用。此外，隨著當(dāng)前和新出現(xiàn)的嚴(yán)重傳染性疾病，免疫接種將繼續(xù)成為最重要的疾病預(yù)防工具。采用免疫接種進行疾病治療已經(jīng)取得了很好的成績，如對一些白血病的成功免疫治療。在免疫過程中，抗原遞送是至關(guān)重要的一步。然而，抗原不能單獨免疫，因為裸抗原不能在疾病預(yù)防和治療過程中誘導(dǎo)有效的免疫應(yīng)答。因此，在實踐中不同種的抗原總是需要免疫佐劑的協(xié)助，以誘導(dǎo)強烈的抗腫瘤細(xì)胞免疫。同時，佐劑能夠有助于誘導(dǎo)強烈的免疫應(yīng)答同時具有生物安全性。迄今為止，在實踐中廣泛使用的免疫佐劑包括弗氏佐劑和鋁佐劑，并且只有后者具有良好的生物安全性才得以被批準(zhǔn)用于臨床。幾十年來，鋁佐劑已經(jīng)被用于捍衛(wèi)人類免疫的許多傳染性疾病。然而，用鋁佐劑免疫仍不能誘導(dǎo)足夠強的細(xì)胞免疫來對抗病毒性感染疾病和腫瘤等嚴(yán)重疾病。因此，迫切需要開發(fā)新型的免疫佐劑以幫助抗原引發(fā)有效的細(xì)胞免疫。

近年來，已經(jīng)進行了許多工作來開發(fā)新的免疫佐劑以輔助抗原遞送。從廣義上講，這種免疫佐劑也可稱為“疫苗遞送系統(tǒng)”。針對整個抗原遞送過程中的不同步驟設(shè)計和制備大量的新型疫苗遞送系統(tǒng)。廣泛采用的疫苗遞送系統(tǒng)的設(shè)計策略包括抗原包封以防止過早降解，控制抗原釋放，可持續(xù)抗原釋放，靶向抗原遞呈細(xì)胞(APCs)，用于細(xì)胞質(zhì)遞送的溶酶體逃逸以促進抗原交叉遞呈然后引起細(xì)胞免疫等。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的首要目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點與不足，提供一種正十六烷基磷酸膽堿。

本發(fā)明的另一目的在于提供所述正十六烷基磷酸膽堿的制備方法。

本發(fā)明的再一目的在于提供所述正十六烷基磷酸膽堿作為疫苗免疫佐劑的應(yīng)用。

本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實現(xiàn)：一種正十六烷基磷酸膽堿，其結(jié)構(gòu)式如式I所示：

所述的正十六烷基磷酸膽堿的制備方法，包括如下步驟：

(1)在保護性氣體氛圍下，將十六烷基二甲基叔胺和甲醇溶解到有機溶劑中，得到混合液Ⅰ；

(2)將步驟(1)中得到的混合液Ⅰ降溫至-90℃～0℃，然后逐滴加入2-氯-2-氧代-1,3,2-二氧磷雜環(huán)戊烷進行反應(yīng)，待反應(yīng)結(jié)束后恢復(fù)至室溫，放置，過濾，取沉淀，得到沉淀物II；

(3)將步驟(2)中得到的沉淀物II加熱至25～90℃，攪拌反應(yīng)，待反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，洗滌，干燥，得到正十六烷基磷酸膽堿(C16-CP)。

步驟(1)中所述的保護性氣體優(yōu)選為氮氣。

步驟(1)中所述的十六烷基二甲基叔胺和甲醇的摩爾比為1:10～10:1；優(yōu)選為2:1。

步驟(1)中所述的有機溶劑優(yōu)選為三乙胺。