[發明專利]一種脂質體制備方法

有效

• 申請號: 201811464832.3
• 申請日: 2018-12-03
• 公開（公告）號: CN109394696B
• 公開（公告）日: 2020-12-01
• 發明（設計）人: 沈清明;戴葉能;蘇金中;范曲立
• 申請（專利權）人: 南京郵電大學
• 主分類號: A61K9/127
• 分類號: A61K9/127;A61K41/00;A61K31/704;A61K49/18;A61K49/08;A61K49/22;A61P35/00
• 代理公司: 南京蘇科專利代理有限責任公司 32102
• 代理人: 姚姣陽

1.一種脂質體制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1:合成二亞乙基三胺五乙酸衍生物：將硬脂胺放入到氯仿中溶解形成4～10ml的硬脂胺的氯仿溶液；將二亞乙基三胺五乙酸雙酐放入到的N,N-二甲基甲酰胺中溶解形成5～10ml二亞乙基三胺五乙酸雙酐的N,N-二甲基甲酰胺溶液，再將硬脂胺的氯仿溶液緩慢加入到二亞乙基三胺五乙酸雙酐的N,N-二甲基甲酰胺溶液中，其中，硬脂胺與二亞乙基三胺五乙酸雙酐的摩爾比為2～4：1，并在40℃下攪拌2～3h后，置于4℃下冷卻2～3h，過濾得到二亞乙基三胺五乙酸-硬脂胺的白色沉淀，然后通過清洗劑清洗所述白色沉淀以除去未反應的二亞乙基三胺五乙酸雙酐和硬脂胺；

S2:合成具有兩親性分子的釓-二亞乙基三胺五乙酸-硬脂胺：將六水氯化釓的水溶液加入到檸檬酸鈉的水溶液中，其中，六水氯化釓與檸檬酸鈉的摩爾比為1:2～4，得到檸檬酸釓溶液；用緩沖液調節所述檸檬酸釓溶液的pH至中性，再將調節至中性后的檸檬酸釓溶液緩慢加入到熱的步驟S1中所述二亞乙基三胺五乙酸-硬脂胺水溶液中，其中金屬釓與二亞乙基三胺五乙酸-硬脂胺含量的比例為1～3:1，在N₂氣氛中室溫下攪拌反應2～4h后過濾產物，沉淀物干燥過夜，即得到釓-二亞乙基三胺五乙酸-硬脂胺；

S3：形成脂質體殼層：將質量比為3～5:1:1的卵磷脂、二硬脂酰基磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-葉酸、及步驟S2中的所述釓-二亞乙基三胺五乙酸-硬脂胺混合溶解于3～6ml含有4％乙醇的水溶液中，并加熱至50～60℃形成熱脂質溶液；

S4:藥物自組裝：將質量比為4:1的月桂酸與硬脂酸比例溶于甲醇溶液制得濃度為4～8mg/ml的月桂酸與硬脂酸低共熔物的甲醇溶液；將濃度為4～8mg/ml的月桂酸與硬脂酸低共熔物的甲醇溶液、濃度為2.5～4mg/ml的吲哚菁綠的N,N-二甲基甲酰胺溶液、及濃度為2.5～4mg/ml的阿霉素的二甲亞砜溶液混合，并逐滴加入到步驟S3中所述的熱脂質溶液形成脂質溶液，并渦旋5～10min；

S5：制備得到脂質體材料：將步驟S4中的脂質溶液在4℃冰水浴中超聲，恢復至室溫后繼續攪拌渦旋5～10min，再通過超濾洗滌將步驟S4中的脂質溶液用超純水多次洗滌，以除去未被包覆的吲哚菁綠、阿霉素和有機溶劑，得到均勻分散的溫敏性脂質體材料。

2.根據權利要求1所述的脂質體制備方法，其特征在于：所述步驟S1中的清洗劑包括丙酮及氯仿，且清洗的順序為丙酮清洗和氯仿清洗。

3.根據權利要求1所述的脂質體制備方法，其特征在于：所述步驟S2中緩沖液為鹽酸與氫氧化鈉的混合液或三羥甲基氨基甲烷緩沖溶液。

4.根據權利要求1所述的脂質體制備方法，其特征在于：所述步驟S2中調節至中性后的檸檬酸釓溶液的pH至為7～7.4。

5.根據權利要求1所述的脂質體制備方法，其特征在于：所述步驟S5中脂質溶液在4℃冰水浴中超聲的超聲時間為10～20min。

6.根據權利要求1所述的脂質體制備方法，其特征在于：所述步驟S5中超濾洗滌的截留分子量為10KDa，轉速為8000～10000rpm。

7.根據權利要求1所述的脂質體制備方法，其特征在于：所述步驟S5中得到的溫敏性脂質體材料還需經過無表面活性劑的醋酸纖維素膜過濾。

8.根據權利要求7所述的脂質體制備方法，其特征在于：所述無表面活性劑的醋酸纖維素膜過濾的過濾孔徑為0.22～0.45μm。