[發明專利]一種蟲草發酵液配置方法

在審

• 申請號: 201811464801.8
• 申請日: 2018-12-03
• 公開（公告）號: CN109456901A
• 公開（公告）日: 2019-03-12
• 發明（設計）人: 馬學甫
• 申請（專利權）人: 天津弘慈生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種蟲草發酵液配置方法，包括如下步驟：S1、冬蟲夏草真菌分離：采用組織分離法可以獲得植物內生菌做為人工冬蟲夏草的生產菌株。與現有技術相比具備以下優點：采用深層發酵生產蟲草菌絲體，一方面很容易從培養液中分離和提取出各種有效成份物質，提取蟲草酸、蟲草素、蟲草多糖等有用物質和具有抗癌作用的冬蟲夏草素及多種氨基酸，大批量生產蟲草菌絲體：另一方面利用1t?10t甚至更大容積的發酵罐內培養，能夠提高產量，保證篩選用藥的物質來源，緩解蟲草資源的緊張狀況，鑒于液體發酵具有周期短，原料及培養條件易得，造價低，收率高和較穩定等特點，對蟲草菌絲體的人工發酵培養應該是主要發展方向。

技術領域

本發明涉及一種生產工藝，更具體地說，尤其涉及一種蟲草發酵液配置方法。

背景技術

隨著人們保健意識的增強，對其具有重要醫療保健功能的蟲草需求必將快速增加，利用蟲草生產保健品的市場潛力較大。但是目前蟲草消費量較小，蟲草銷售還存在價格不穩、渠道不暢等問題。

目前我國蟲草培養大部分是人工栽培培養，由于受地理環境、氣候、水土及蟲草品種等各方面的自然條件影響，蟲草的質量和產量極不穩定，難于實現規模產業化，為此，我們提出一種蟲草發酵液配置方法。

發明內容

本發明的目的是為了解決現有技術中存在的缺點，而提出的一種蟲草發酵液配置方法，能夠帶來的好處：采用深層發酵生產蟲草菌絲體，一方面很容易從培養液中分離和提取出各種有效成份物質，提取蟲草酸、蟲草素、蟲草多糖等有用物質和具有抗癌作用的冬蟲夏草素及多種氨基酸，大批量生產蟲草菌絲體：另一方面利用1t-10t甚至更大容積的發酵罐內培養，能夠提高產量，保證篩選用藥的物質來源，緩解蟲草資源的緊張狀況，鑒于液體發酵具有周期短，原料及培養條件易得，造價低，收率高和較穩定等特點，對蟲草菌絲體的人工發酵培養應該是主要發展方向。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：一種蟲草發酵液配置方法，包括如下步驟：

S1、冬蟲夏草真菌分離：采用組織分離法可以獲得植物內生菌做為人工冬蟲夏草的生產菌株，即采用直接切取蟲草的子座部分或菌核部分的一小塊組織，經表面消毒和滅菌水洗后，在無菌操作條件下，由蟲草體上轉移到培養基上，切取組織1mm左右，組織切取過大會增加染菌的機會，組織切取過小，一方面在表面消毒過程中易將該組織殺死，另一方面也相應地延長了蟲草菌種的生長時間，取春夏之交的新鮮冬蟲夏草的子座，用0.1L汞液表面消毒5min，再用無菌水反復沖洗，在無菌條件下切去外層、避開腸邊，切取內部白色組織1cm㎡左右，壓碎涂于培養基表面，20℃溫箱4個月，得到母種；

S2、斜面培養：以蔗糖2％，工業蛋白胨0.15％，酵母粉1％，MeSO，0.05％，KHEPO，0.1％為培養基(oH6～7)，于121℃滅菌30min，接種于固體培養基上于27士1℃，培養4～5d，菌絲均勻長滿斜面后，置冰箱4℃保存備用；

S3、搖瓶培養：以蔗糖2％，工業蛋白胨0.15％，酵母粉1％，MgS0。0.05％，KHP0。0.1％為培養基(pH6～7)，采用250m1l三角瓶裝培養基50m1，采用27±1C，搖床轉速230r/min,振蕩培養；

S4、搖瓶種子培養：以蔗糖2％，工業蛋白胨0.15％，酵母粉1％，MeSO。0.05％，KHLPO:0.1％為培養基(DH6-7)，采用500ml三角瓶，裝培養基120ml，采用27+1℃，搖床轉速230r/min，振蕩培養48～60h，鏡檢菌絲粗壯，無雜菌后，合并作為進罐種子；

S5、種子罐培養：葡萄糖25kg/nm2，豆粕20kg/m²，豆油0.6kg/m，硫酸鎂0.6kg/m，磷酸二氫鉀0.1kg/m2，蛋白胨3kg/m’為發酵液(DH6～7)，采用1m°種子罐，裝料系數為0.8，在27士1C溫度下發酵培養；