[發(fā)明專利]一種蟲草發(fā)酵液配置方法

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201811464801.8
• 申請日: 2018-12-03
• 公開（公告）號: CN109456901A
• 公開（公告）日: 2019-03-12
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 馬學(xué)甫
• 申請（專利權(quán)）人: 天津弘慈生物科技有限公司
• 主分類號: C12N1/14
• 分類號: C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種蟲草發(fā)酵液配置方法，其特征在于：包括如下步驟：

S1、冬蟲夏草真菌分離：采用組織分離法可以獲得植物內(nèi)生菌做為人工冬蟲夏草的生產(chǎn)菌株，即采用直接切取蟲草的子座部分或菌核部分的一小塊組織，經(jīng)表面消毒和滅菌水洗后，在無菌操作條件下，由蟲草體上轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)基上，切取組織1mm左右，組織切取過大會增加染菌的機(jī)會，組織切取過小，一方面在表面消毒過程中易將該組織殺死，另一方面也相應(yīng)地延長了蟲草菌種的生長時間，取春夏之交的新鮮冬蟲夏草的子座，用0.1L汞液表面消毒5min，再用無菌水反復(fù)沖洗，在無菌條件下切去外層、避開腸邊，切取內(nèi)部白色組織1cm㎡左右，壓碎涂于培養(yǎng)基表面，20℃溫箱4個月，得到母種；

S2、斜面培養(yǎng)：以蔗糖2％，工業(yè)蛋白胨0.15％，酵母粉1％，MeSO，0.05％，KHEPO，0.1％為培養(yǎng)基(oH6～7)，于121℃滅菌30min，接種于固體培養(yǎng)基上于27士1℃，培養(yǎng)4～5d，菌絲均勻長滿斜面后，置冰箱4℃保存?zhèn)溆茫?/p>

S3、搖瓶培養(yǎng)：以蔗糖2％，工業(yè)蛋白胨0.15％，酵母粉1％，MgS0。0.05％，KHP0。0.1％為培養(yǎng)基(pH6～7)，采用250m1l三角瓶裝培養(yǎng)基50m1，采用27±1C，搖床轉(zhuǎn)速230r/min,振蕩培養(yǎng)；

S4、搖瓶種子培養(yǎng)：以蔗糖2％，工業(yè)蛋白胨0.15％，酵母粉1％，MeSO。0.05％，KHLPO:0.1％為培養(yǎng)基(DH6-7)，采用500ml三角瓶，裝培養(yǎng)基120ml，采用27+1℃，搖床轉(zhuǎn)速230r/min，振蕩培養(yǎng)48～60h，鏡檢菌絲粗壯，無雜菌后，合并作為進(jìn)罐種子；

S5、種子罐培養(yǎng)：葡萄糖25kg/nm2，豆粕20kg/m²，豆油0.6kg/m，硫酸鎂0.6kg/m，磷酸二氫鉀0.1kg/m2，蛋白胨3kg/m’為發(fā)酵液(DH6～7)，采用1m°種子罐，裝料系數(shù)為0.8，在27士1C溫度下發(fā)酵培養(yǎng)；

S6、發(fā)酵罐培養(yǎng)：葡萄糖100kg/m2，豆粕25kg/m3，豆油0.9kg/m，硫酸鎂0.9kg/m，磷酸二氫鉀0.2kg/m2，蛋白胨6kg/m，消泡劑0.6kg/m3為培養(yǎng)基(DH6～7)，采用10m°發(fā)酵罐，裝料系數(shù)為0.8，在27±1℃溫度下培養(yǎng)。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種蟲草發(fā)酵液配置方法，其特征在于：所述車間組成及其所需時間：配料0.8h；攪拌0.5h；投料0.5h；蒸汽滅菌1h；冷卻到27℃約1h；接種0.2h；發(fā)酵44h；發(fā)酵總反應(yīng)時間48h；清洗發(fā)酵罐1.5h。