[發(fā)明專利]從滇山茶中提取山奈酚葡萄糖苷類化合物的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811459485.5
• 申請日: 2018-11-30
• 公開（公告）號: CN109265494B
• 公開（公告）日: 2021-09-21
• 發(fā)明（設計）人: 王蔚婕;鐘文惠;曹清明;易英建;陳嘉琳
• 申請（專利權）人: 中南林業(yè)科技大學
• 主分類號: C07H1/08
• 分類號: C07H1/08;C07H17/07
• 代理公司: 北京超凡志成知識產(chǎn)權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 許洪潔

1.一種從滇山茶中提取山奈酚葡萄糖苷類化合物的方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟:

A.將滇山茶茶餅用乙醇水溶液進行超聲浸提，得到提取液；將所述提取液減壓蒸餾至無醇得到濃縮液；

B.將所述濃縮液加入大孔樹脂層析柱，依次用水、20％乙醇、50％乙醇、80％乙醇進行梯度洗脫，經(jīng)色譜檢測，收集含有目標提取物的洗脫液得粗流份段，將所述粗流份段濃縮，得到粗流份段濃縮液；

C.在所述粗流份段濃縮液中加入硅膠，攪拌均勻后烘干得到待處理樣品；將所述待處理樣品使用干法上樣至硅膠層析柱中，用二氯甲烷-甲醇溶液體系進行梯度洗脫，經(jīng)色譜檢測，收集含有目標提取物的洗脫液得準流份段；減壓濃縮、干燥得到粗分離物；

D.使用C18色譜柱、用甲醇-甲酸水溶液體系作為流動相，將所述粗分離物用溶劑溶解后進樣，進行等度洗脫，收集含有目標化合物的流份段，濃縮凍干得到目標化合物，所述目標化合物的結構式為：

其中，所述步驟B中，所述大孔樹脂層析柱的柱體積為2L；每500mL收集一次洗脫液并順次標號，所述粗流份段由第A44-45號洗脫液合并得到；所述大孔樹脂層析柱中的大孔樹脂的型號為D101，大孔樹脂粒徑60-16目、比表面積≥550m²/g、酚/干基的比照吸附量≥20mg/g。

2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述大孔樹脂使用前需用乙醇洗脫至顏色清亮，再用純水洗脫至無醇味。

3.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟C中，所述硅膠層析柱的制作方法為：取硅膠和二氯甲烷溶液混合，超聲處理去除氣泡后緩慢裝入層析柱中，并用壓力泵對柱子進行加壓處理，得到所述硅膠層析柱。

4.根據(jù)權利要求3所述的方法，其特征在于，所述步驟C中，所述二氯甲烷-甲醇溶液體系為：流動相A為二氯甲烷，流動相B為甲醇；所述梯度洗脫的配比為：所述流動相A與所述流動相B的體積比依次為7:1，5:1，3:1，1:1，1:0，每個洗脫梯度洗脫至無色為止。

5.根據(jù)權利要求4所述的方法，其特征在于，所述步驟C中，每25-35g所述硅膠對應100mL所述粗流份段濃縮液；所述烘干的溫度為45-55℃。

6.根據(jù)權利要求5所述的方法，其特征在于，所述步驟C中，所述硅膠層析柱的柱體積為1.2L；每200mL收集一次洗脫液并順次標號，所述準流份段由第C4號洗脫液得到。

7.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟D中，所述C18色譜柱的規(guī)格為：Venusil MP C18，尺寸10mm×250mm，填料粒徑為5微米。

8.根據(jù)權利要求7所述的方法，其特征在于，所述甲醇-甲酸水溶液體系為：流動相C為甲醇，流動相D為體積分數(shù)0.1％的甲酸水溶液；所述等度洗脫的配比為：所述流動相C與所述流動相D的體積比為25：75。

9.根據(jù)權利要求1-8任一項所述的方法，其特征在于，所述乙醇水溶液的體積分數(shù)為50-60％；所述浸提的方法為：料液比為1kg所述滇山茶茶餅對應3-4L所述乙醇水溶液，在30-40℃條件下超聲浸提2-4次，過濾得到所述提取液。