[發(fā)明專利]一種雞體尺性狀CNV標(biāo)記輔助選育多基因檢測(cè)方法及應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811455023.6
• 申請(qǐng)日: 2018-11-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109852699A
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-06-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 伍革民;李冬光;韓雪;徐龍?chǎng)?/a>;朱麗莉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 貴州省畜牧獸醫(yī)研究所
• 主分類號(hào): C12Q1/6888
• 分類號(hào): C12Q1/6888;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 貴陽(yáng)睿騰知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 52114
• 代理人: 谷慶紅

1.一種用于檢測(cè)雞胸角、胸寬性狀的分子標(biāo)記組合，其特征在于，其為CNV1、CNV2和CNV3，這三個(gè)分子標(biāo)記分別是雞SRMP2基因參考基因組序列(Chromosome 1,NC_006088.4)、MHRP2B基因參考基因組序列(Chromosome 1,NC_006088.5)、MH7基因參考基因組序列(Chromosome Z,NC_006127.5)。

2.權(quán)利要求1所述的分子標(biāo)記組合在雞育種中的應(yīng)用。

3.一種用于檢測(cè)雞胸角、胸寬性狀的引物組合，其特征在于，其目標(biāo)基因引物對(duì)為P1(F1、R1)、P2(F2、R2)和P3(F3、R3)引物，其核苷酸序列如下：

所述的引物對(duì)P1為：

上游引物F1:AACCTGCTCAGCTTTTCCTGACC

下游引物R1：CTGCTCTGGAGGATCCCAAAGT

所述的引物對(duì)P2為：

上游引物F2:GCATGTGGTGGGGCTCTTTAC

下游引物R2：GCGCCTTGCAGAGATCAATG

所述的引物對(duì)P3為：

上游引物F3:GGAGCACTGGAGGGTCAGAAA

下游引物R3：CTGCTCTGGAGGATCCCAAAGT。

4.權(quán)利要求3所述的引物組合在雞育種中的應(yīng)用。

5.一種雞體尺性狀CNV標(biāo)記輔助選育多基因檢測(cè)方法，其特征在于，包括如下步驟：(1)對(duì)雞SRMP2基因參考基因組序列(Chromosome 1,NC_006088.4)、MHRP2B基因參考基因組序列(Chromosome 1,NC_006088.5)、MH7基因參考基因組序列(Chromosome Z,NC_006127.5)進(jìn)行PCR擴(kuò)增、熒光標(biāo)記和測(cè)序后，通過(guò)統(tǒng)計(jì)分析軟件和EXCEL進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)算其的基因拷貝數(shù)；(2)利用拷貝數(shù)情況估測(cè)雞的體尺性狀，所述CNV標(biāo)記拷貝數(shù)越高，該雞的胸角及胸寬越低。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的雞體尺性狀CNV標(biāo)記輔助選育多基因檢測(cè)方法，其特征在于，所述對(duì)拷貝數(shù)進(jìn)行檢測(cè)，是以雞基因組DNA為模板，設(shè)置參照基因，以目標(biāo)基因引物對(duì)P1(F1、R1)、P2(F2、R2)和P3(F3、R3)引物，通過(guò)多基因拷貝數(shù)檢測(cè)方法進(jìn)行PCR擴(kuò)增、熒光標(biāo)記和測(cè)序后，通過(guò)統(tǒng)計(jì)分析軟件和EXCEL進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)算基因拷貝數(shù)；

所述的引物對(duì)P1為：

上游引物F1:AACCTGCTCAGCTTTTCCTGACC

下游引物R1：CTGCTCTGGAGGATCCCAAAGT

所述的引物對(duì)P2為：

上游引物F2:GCATGTGGTGGGGCTCTTTAC

下游引物R2：GCGCCTTGCAGAGATCAATG

所述的引物對(duì)P3為：

上游引物F3:GGAGCACTGGAGGGTCAGAAA

下游引物R3：CTGCTCTGGAGGATCCCAAAGT。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的雞體尺性狀CNV標(biāo)記輔助選育多基因檢測(cè)方法，其特征在于，所述的PCR擴(kuò)增、熒光標(biāo)記及拷貝數(shù)計(jì)算方法為：取2μl DNA模板與2μl內(nèi)對(duì)照DNA混合液混勻后，加入10μl 2x PCR Master Mix,1μl多重PCR引物混合液以及5μl ddH2O；PCR循環(huán)程序：95℃10min；11cycles x(94℃20s,65℃-0.5℃/cycle 40s,72℃1min30s)；24cycles x(94℃20s,59℃30s,72℃1.5min)；60℃60min；4℃保存，取1μl PCR產(chǎn)物稀釋5倍后，取1μl與0.5μl Liz500SIZE STANDARD，8.5μl Hi-Di混勻，95℃變性5分鐘后上ABI3730XL測(cè)序儀；根據(jù)每個(gè)基因的樣本DNA/內(nèi)對(duì)照DNA擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度及熒光標(biāo)記信息，利用GeneMapper5.0對(duì)ABI3730XL測(cè)序儀生成的數(shù)據(jù)文件進(jìn)行分析，輸出每個(gè)產(chǎn)物峰的峰高以及峰面積；輸出結(jié)果采用EXCEL進(jìn)行整理、統(tǒng)計(jì)和分析。