[發(fā)明專利]一對特異性鑒別寬體金線蛭的引物

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811449817.1
• 申請日: 2018-11-30
• 公開（公告）號: CN109504782A
• 公開（公告）日: 2019-03-22
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 劉杰;鄭健;過立農(nóng);高妍;昝珂;李文靜;李麗瀟;黃濤宏
• 申請（專利權(quán)）人: 中國食品藥品檢定研究院
• 主分類號: C12Q1/6888
• 分類號: C12Q1/6888;C12N15/11
• 代理公司: 湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102
• 代理人: 張秋燕

1.用于鑒定寬體金線蛭的特異性引物對，其特征在于由引物KT-5’和引物KT-3’組成，所述引物KT-5’和所述引物KT-3’均為單鏈DNA分子，核苷酸序列依次為序列表中的序列1(TATGTATTGAAAGGGTATTCAATCG)和序列2(TTAAGAATGATCATCAGTATATAGTG)。

2.權(quán)利要求1所述特異性引物對的應(yīng)用，其特征在于為如下a)-f)中任一種：

a)制備用于檢測或輔助檢測寬體金線蛭的試劑盒；

b)檢測或輔助檢測待測樣品中是否含有或候選含有寬體金線蛭；

c)制備用于鑒定或輔助鑒定寬體金線蛭的試劑盒；

d)鑒定或輔助鑒定待測樣品是否為或候選為寬體金線蛭；

e)制備用于鑒定或輔助鑒定市售寬體金線蛭的真?zhèn)涡缘脑噭┖校?/p>

f)鑒定或輔助鑒定市售寬體金線蛭的真?zhèn)涡浴?/p>

3.含有權(quán)利要求1所述特異性引物對的試劑盒，其特征在于所述試劑盒用于鑒定或者輔助鑒定寬體金線蛭。

4.權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于所述試劑盒還包括Taq DNA聚合酶、dNTP和反應(yīng)緩沖液。

5.權(quán)利要求3所述的試劑盒的應(yīng)用，其特征在于為如下b1)或b2)或b3)：

b1)檢測或輔助檢測待測樣品中是否含有或候選含有寬體金線蛭；

b2)鑒定或輔助鑒定待測樣品是否為或候選為寬體金線蛭；

b3)鑒定或輔助鑒定市售寬體金線蛭的真?zhèn)涡浴?/p>

6.一種檢測待測樣品是否含有或候選含有寬體金線蛭的方法，其特征在于包括如下步驟：提取待測樣品的總DNA作為模板，采用權(quán)利要求1所述的特異性引物對進行PCR擴增，如果能夠?qū)崿F(xiàn)有效擴增，則所述待測樣品中含有或候選含有寬體金線蛭；如果不能實現(xiàn)有效擴增，則所述待測樣品中不含有或候選不含有寬體金線蛭。

7.一種鑒定待測樣品是否為或候選為寬體金線蛭的方法，其特征在于包括如下步驟：提取待測樣品的基因組DNA作為模板，采用權(quán)利要求1所述的特異性引物對進行PCR擴增，如果能夠?qū)崿F(xiàn)有效擴增，則所述待測樣品為或候選為寬體金線蛭；如果不能實現(xiàn)有效擴增，則所述待測樣品不為或候選不為寬體金線蛭。

8.一種鑒定市售寬體金線蛭的真?zhèn)涡缘姆椒ǎ砂ㄈ缦虏襟E：提取市售寬體金線蛭的基因組DNA作為模板，采用權(quán)利要求1所述的特異性引物對進行PCR擴增，如果能夠?qū)崿F(xiàn)有效擴增，則所述市售寬體金線蛭為或候選為真品；如果不能實現(xiàn)有效擴增，則所述市售寬體金線蛭為或候選為偽品。

9.如權(quán)利要求6或7或8所述的方法，其特征在于所述“能夠?qū)崿F(xiàn)有效擴增”為PCR擴增產(chǎn)物中含有400-500bp的DNA片段；所述“不能實現(xiàn)有效擴增”為PCR擴增產(chǎn)物中不含有400-500bp的DNA片段。

10.如權(quán)利要求6或7或8所述的方法，其特征在于進行所述PCR擴增時，采用的擴增程序具體可為94℃預變性3min；94℃變性30s，55℃退火30s，72℃延伸30s；35～38個循環(huán)；72℃延伸5min；所述PCR擴增的體系可為：總體積為20μl時，SYBR Premix Ex Taq II 10μl，KT-5’引物0.4μl，KT-3’引物0.4μl，模板1μl，滅菌蒸餾水補齊20μl。