[發(fā)明專利]循環(huán)腫瘤細胞的捕獲方法及捕獲試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811447767.3
• 申請日: 2018-11-29
• 公開（公告）號: CN109856388A
• 公開（公告）日: 2019-06-07
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 駱靖華;王燕;劉霞;方楠;王建偉;伍啟熹;劉倩;劉珂弟;唐宇
• 申請（專利權(quán)）人: 北京優(yōu)迅醫(yī)學檢驗實驗室有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/574
• 代理公司: 北京康信知識產(chǎn)權(quán)代理有限責任公司 11240
• 代理人: 韓建偉;金田蘊

1.一種循環(huán)腫瘤細胞的捕獲方法，其特征在于，包括以下步驟：

S1，利用淋巴細胞分離液對外周血中的細胞進行分離，取得白膜層細胞；

S2，利用EpCAM抗體和Vimentin抗體捕獲所述白膜層細胞中的循環(huán)腫瘤細胞。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的捕獲方法，其特征在于，所述S2具體包括中，向含有所述白膜層細胞的液體中加入EpCAM抗體和Vimentin抗體，孵育后，棄上清，重懸抗體細胞混合物加入鏈霉親和素磁珠或親和素磁珠孵育，與鏈霉親和磁珠或親和素磁珠結(jié)合的細胞為最終捕獲到的循環(huán)腫瘤細胞。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的捕獲方法，其特征在于，所述S2中：重懸抗體細胞混合物加入鏈霉親和素磁珠孵育后還包括將磁珠抗體細胞混合物貼在磁力架上，待上清清澈后，將上清吸出，加入洗滌液混勻后再次貼在磁力架上，待上清清澈后，將上清吸出，重復操作多次，得到所述循環(huán)腫瘤細胞。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的捕獲方法，其特征在于，在所述S1和S2之間還包括：去除所述白膜層細胞中的白細胞，得到第一上清液；所述第一上清液即為含有所述白膜層細胞的液體；

優(yōu)選的，利用CD45磁珠去除所述白膜層細胞中的白細胞。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的捕獲方法，其特征在于，所述淋巴細胞分離液為Ficoll淋巴細胞分離液。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的捕獲方法，其特征在于，所述S1具體包括：

用PBS將所述外周血進行稀釋，得到稀釋后的外周血；

所述Ficoll淋巴細胞分離液盛放在離心管中，將所述稀釋后的外周血加入所述Ficoll淋巴細胞分離液的上層，室溫離心，取中間的白膜層用PBS進行洗滌，得到所述白膜層細胞。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的捕獲方法，其特征在于，所述捕獲方法還包括：S4，免疫熒光染色檢測捕獲的細胞數(shù)量。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的捕獲方法，其特征在于，所述S4具體包括：

S41，將分離得到的所述循環(huán)腫瘤細胞固定后用DAPI熒光染料標記細胞核；

S42，用CD45綠色熒光抗體標記細胞；

S43，用CKmix、EpCAM、vimentin紅色熒光抗體標記細胞；

S44，在三色熒光顯微鏡下進行結(jié)果分析，將DAPI+、CD45-、CKmix+或EpCAM+或vimentin+的細胞定義為CTCs。

9.一種循環(huán)腫瘤細胞的捕獲試劑盒，其特征在于，包括：淋巴細胞分離液、CD45磁珠和EpCAM抗體。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的捕獲試劑盒，其特征在于，所述捕獲試劑盒還包括Vimentin抗體；

優(yōu)選的，所述捕獲試劑盒還包括鏈霉親和磁珠或親和素磁珠。