[發明專利]一種通過未成熟胚快速培育水松幼苗的方法

有效

• 申請號: 201811446335.0
• 申請日: 2018-11-29
• 公開（公告）號: CN109601377B
• 公開（公告）日: 2022-05-06
• 發明（設計）人: 徐禮根;陳利萍;馬思妤;帥輝;劉柯;王挺進;李玉卓;曹麗雯
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 黃歡娣;邱啟旺

本發明公開了一種通過未成熟胚快速培育水松幼苗的方法，旨在解決水松群體數量少，以及生產上通過扦插繁殖導致的遺傳多樣性低等問題。本發明以浙江省余杭區瓶窯鎮水松扦插植株的未成熟球果為起始材料，表面消毒后剝取其胚乳與未成熟胚，通過胚培養技術快速培育水松植株有性后代，短時間內獲得數量較多的水松幼苗。本發明的優點是：利用水松帶有胚乳的未成熟胚，培養30天后，獲得水松有性后代群體，改善水松主要通過扦插繁殖的現狀，加快水松幼苗培育速度。該方法可操作性強，簡單高效，污染率低，對世界珍稀瀕危植物保護以及苗木的快速培育具有重要意義。

技術領域

本發明涉及一種通過未成熟胚快速培育水松幼苗的方法，從而達到珍稀瀕危物種保護以及快速繁殖苗木的目的。

背景技術

水松，拉丁學名：Glyptostrobus pensilis；

別名：水蓮、水帝松、水杉松、水極、長柏；

科屬：柏科落羽杉亞科水松屬；

原產地及分布：水松屬現僅存水松一種，在第三紀以前廣泛分布于北半球，到第四紀冰川過后，水松類植物在歐美滅絕，現僅僅分布于我國和越南。水松生長于緯度13°09′(越南)-37°33′(山東煙臺)，經度102°42′(云南昆明)-121°31′(中國臺北)，海拔32-1980m的地區。分布于中國廣州珠江三角洲和福建中部及閩江下游海拔1000米以下地區。廣東東部及西部、福建西部及北部、江西東部、四川東南部、廣西及云南東南部也有零星分布。在南京、武漢、廬山、上海、杭州等地為引種栽培。水松作為一種罕見的古生代孑遺樹種，由于自然地理因素和人為活動的影響，水松數量日益減少，處于瀕危狀態。

水松瀕危的原因主要有以下幾個：生殖生物學障礙、生態因子脅迫、人為干擾和遺傳多樣性降低。其中，以水松生殖生物學障礙為主。因為水松屬雌雄同株的單性花植物，成年后在最初開花的數年內只形成雌花，且花期很短，通常只有2個星期。水松是風媒花，種子萌發條件要求嚴格，落在水濕之地或干旱的土壤中均不能發芽。水松作為喜濕樹種，種子成熟后多掉落于沼澤中，萌芽率極低或沒有，且幼苗長期生長在水中，成活率不高。目前我國絕大部分野生水松種群主要是通過營養體扦插繁殖后代。這進一步加劇了種群內部遺傳多樣性在無性世代之間的下降。

發明內容

本發明的目的是針對現有技術的不足，提供一種通過未成熟胚快速培育水松幼苗的方法。

本發明的目的是通過以下技術方案實現的：一種通過未成熟胚快速培育水松幼苗的方法，包括如下步驟：

(1)采集水松植株上的未成熟球果；

(2)剝取未成熟種子并進行表面滅菌；

(3)用解剖刀切開未成熟種子，剝取帶有胚乳的未成熟胚，并接種到培養基上，將其水平放置。20±2℃黑暗條件下培養3d；

(4)暗培養后，在弱光條件下(光照強度為20μmol·m^-2·s^-1、光照時間為 12h/d)培養，直到胚萌發；

(5)胚萌發后，在正常光照條件下(光照強度為80μmol·m^-2·s^-1、光照時間為12h/d)培養10d后，將幼苗從胚乳中分離并接種到培養基上進行保存，培養條件為溫度20±2℃、光照強度為80μmol·m^-2·s^-1、光照時間為12h/d。

進一步地，在所述步驟(1)中，所述未成熟球果形態特征為球果呈現綠色。

進一步地，在所述步驟(2)中，所述表面滅菌程序為：將未成熟種子置于流水下沖洗3h，沖洗后在超凈工作臺上用體積分數為70％乙醇水溶液浸泡并振蕩30s，無菌水沖洗3次，每次1min。再用質量分數為0.1％的氯化汞的水溶液浸泡并振蕩10min后，用無菌水沖洗5次，每次1min。最后用無菌濾紙吸干種子表面多余的水分。