[發明專利]一種通過未成熟胚快速培育水松幼苗的方法

有效

• 申請號: 201811446335.0
• 申請日: 2018-11-29
• 公開（公告）號: CN109601377B
• 公開（公告）日: 2022-05-06
• 發明（設計）人: 徐禮根;陳利萍;馬思妤;帥輝;劉柯;王挺進;李玉卓;曹麗雯
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司 33200
• 代理人: 黃歡娣;邱啟旺

1.一種通過未成熟胚快速培育水松幼苗的方法，其特征在于，包括如下步驟：

(1)剝取水松植株上的未成熟種子并進行表面滅菌；所述未成熟球果形態特征為球果呈現綠色且未開裂；

(2)用解剖刀切開未成熟種子，剝取帶有胚乳的未成熟胚并接種到培養基上，將其水平放置；20±2℃黑暗條件下培養3d；

(3)暗培養后，在光照強度為20μmol·m^-2·s^-1、光照時間為12h/d的弱光條件下培養，直到胚萌發；

(4)胚萌發后，在光照強度為80μmol·m^-2·s^-1、光照時間為12h/d的正常光照條件下培養10d后，將幼苗從胚乳中分離并接種到培養基上進行保存，培養條件為溫度20±2℃、光照強度為80μmol·m^-2·s^-1、光照時間為12h/d；

在所述步驟(2)和步驟(4)中，培養基以DCR為基本培養基，另外添加蔗糖、瓊脂、水解酪蛋白，蔗糖、瓊脂、水解酪蛋白的濃度分別為20g/L、8g/L、500mg/L，培養基的pH為5.8。

2.根據權利要求1所述的通過未成熟胚快速培育水松幼苗的方法，其特征在于：在所述步驟(1)中，所述表面滅菌程序為：將未成熟種子置于流水下沖洗3h，沖洗后在超凈工作臺上用體積分數為70％乙醇水溶液浸泡并振蕩30s，無菌水沖洗3次，每次1min；再用質量分數為0.1％的氯化汞的水溶液浸泡并振蕩10min后，用無菌水沖洗5次，每次1min；最后用無菌濾紙吸干種子表面多余的水分。

3.根據權利要求1所述的通過未成熟胚快速培育水松幼苗的方法，其特征在于：在所述步驟(2)中，所述剝取帶有胚乳的未成熟胚的方法為左手用無菌鑷子固定未成熟種子，右手用無菌解剖刀在距種皮邊緣0.5mm，分別進行縱切和橫切，用鑷子將種皮從未成熟胚及其胚乳上分離。

4.根據權利要求1所述的通過未成熟胚快速培育水松幼苗的方法，其特征在于：在所述步驟(3)中，所述胚萌發形態特征為子葉從胚乳中伸出。

5.根據權利要求1所述的通過未成熟胚快速培育水松幼苗的方法，其特征在于：在所述步驟(4)中，分離幼苗的方法為用滅菌的解剖刀將胚乳縱向切開后，將幼苗從胚乳中分離。