[發明專利]一種生產丁二酸的代謝工程脫氮假單胞菌、其構建方法及其應用在審
| 申請號： | 201811442844.6 | 申請日： | 2018-11-29 |
| 公開（公告）號： | CN109468257A | 公開（公告）日： | 2019-03-15 |
| 發明（設計）人： | 周生芳;趙梅;張春媚 | 申請（專利權）人： | 江蘇師范大學 |
| 主分類號： | C12N1/21 | 分類號： | C12N1/21;C12N15/78;C12P7/46;C12R1/38 |
| 代理公司： | 南京經緯專利商標代理有限公司 32200 | 代理人： | 周敏 |
| 地址： | 221000 江*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 脫氮假單胞菌 丁二酸 構建 乙酸 乙酰輔酶A 代謝工程 敲除 乙酰輔酶A合成酶基因 基因工程領域 代謝中間體 基因組DNA 發酵工程 好氧發酵 生物合成 乙酸代謝 原始材料 應用 基因 生產 | ||
1.一種生產丁二酸的代謝工程脫氮假單胞菌的構建方法，其特征在于，所述構建方法為下列方法之一：
方法1：將脫氮假單胞菌的基因組DNA中敲除sdhAB基因；
方法2：將脫氮假單胞菌的基因組DNA中敲除sdhAB基因，并將脫氮假單胞菌來源的乙酰輔酶A合成酶基因acs在脫氮假單胞菌中過表達；
方法3：將脫氮假單胞菌的基因組DNA中敲除sdhAB基因和pta-ack基因；
方法4：將脫氮假單胞菌的基因組DNA中敲除sdhAB基因和pta-ack基因，并將脫氮假單胞菌來源的乙酰輔酶A合成酶基因acs在脫氮假單胞菌中過表達。
2.根據權利要求1所述的一種生產丁二酸的代謝工程脫氮假單胞菌的構建方法，其特征在于，所述將脫氮假單胞菌來源的乙酰輔酶A合成酶基因acs在脫氮假單胞菌中過表達具體包括：將脫氮假單胞菌來源的乙酰輔酶A合成酶基因acs構建到大腸桿菌-假單胞菌穿梭質粒pUCPK上，得到的重組質粒pUCPK-acs，然后用pUCPK-acs轉化脫氮假單胞菌，得到重組的脫氮假單胞菌。
3.根據權利要求1所述的一種生產丁二酸的代謝工程脫氮假單胞菌的構建方法，其特征在于，所述假單胞菌為ATCC13867。
4.由上述任一權利要求所述的一種生產丁二酸的代謝工程脫氮假單胞菌的構建方法所構建的代謝工程脫氮假單胞菌菌株。
5.權利要求4所述的代謝工程脫氮假單胞菌菌株在生產丁二酸中的應用。
6.根據權利5中所述的代謝工程脫氮假單胞菌菌株在生產丁二酸中的應用，其特征在于，所述發酵是以乙酸為唯一原料進行好氧發酵。
7.根據權利要求6所述的代謝工程脫氮假單胞菌菌株在生產丁二酸中的應用，其特征在于，所用發酵培養基配方為：100mmol/L磷酸緩沖液、8g/L乙酸鈉、0.25g/L硫酸鎂、1g/L氯化銨、1g/L酵母膏；其中，磷酸緩沖液的pH＝7.0。
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