[發(fā)明專利]一種基于NH2

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201811437345.8
• 申請(qǐng)日: 2018-11-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN109557060B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-10-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 林天然;秦雨欣;李金瑩;覃思媛;黃媛林;侯麗
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 廣西師范大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/64
• 分類號(hào): G01N21/64
• 代理公司: 桂林市華杰專利商標(biāo)事務(wù)所有限責(zé)任公司 45112
• 代理人: 楊雪梅

1.一種非疾病診斷目的的基于NH₂-Cu-MOF的可視化檢測(cè)血清中堿性磷酸酶活性的方法，其特征在于，包括如下步驟：

（1）合成NH₂-Cu-MOF納米酶材料，包括如下步驟：

（1.1）先將Cu(NO₃)₂·3H₂O溶解在去離子水中， Cu(NO₃)₂·3H₂O和去離子水的質(zhì)量比為1:10；

（1.2）將溶解有2-氨基對(duì)苯二甲酸的DMF溶液和乙醇混合后，加入步驟（1.1）的溶液中，混合均勻；

DMF和乙醇溶劑的體積比為1:1，Cu(NO₃)₂·3H₂O和2-氨基對(duì)苯二甲酸的質(zhì)量濃度比為2:1-3:1；

（1.3）充分混勻后，將溶液置于特氟龍襯里的高壓釜中，在80°C-90°C下反應(yīng)；

（1.4）最后，通過(guò)離心收集NH₂-Cu-MOF，并用DMF、乙醇和去離子水依次洗后自然烘干，合成NH₂-Cu-MOF納米酶材料；

（2）利用NH₂-Cu-MOF納米酶和瓊脂糖制備檢測(cè)堿性磷酸酶活性的凝膠檢測(cè)管，包括如下步驟：

（2.1）先將瓊脂糖溶于沸水中制得瓊脂糖凝膠溶液，瓊脂糖質(zhì)量濃度為5g/L-15g/L；

（2.2）將NH₂-Cu-MOF納米酶的溶液加入到瓊脂糖凝膠溶液中，混勻，其中，NH₂-Cu-MOF納米酶濃度為0.3-0.6g/L；

（2.3）混勻后，取體積為0.050-0.250mL混合液到測(cè)試管的蓋子里，放置5 min后凝膠凝固，蓋上蓋子，在4℃下儲(chǔ)存；

（3）檢測(cè)時(shí)，首先繪制凝膠顏色隨堿性磷酸酶活力大小變化的工作曲線，將不同活力大小的堿性磷酸酶標(biāo)準(zhǔn)溶液、67μL ppi溶液加入到凝膠測(cè)試管中，正立放于37°C恒溫培養(yǎng)振蕩器中孵育30 min，然后加入80μL OPD溶液，倒立置于37°C恒溫培養(yǎng)振蕩器中孵育40 min，在紫外燈下拍照，使用ColorSchemer Studio軟件讀取照片中溶液的RGB值，計(jì)算空白溶液和待測(cè)液的R /(R+G+B)，并以△R /(R+G+B)值作縱坐標(biāo)，即可得到凝膠顏色的△R /(R+G+B)值隨堿性磷酸酶活力大小變化的變化曲線，即檢測(cè)血清中堿性磷酸酶活力的工作曲線；

其次，對(duì)實(shí)際樣進(jìn)行檢測(cè)：吸取60 μL的血清、67μL ppi溶液加入到凝膠測(cè)試管中，正立置于37°C恒溫培養(yǎng)振蕩器中孵育30 min，而后加入80μL OPD溶液，倒立置于37°C恒溫培養(yǎng)振蕩器中孵育40 min，在紫外燈下拍照，可得顏色變化；使用ColorSchemer Studio軟件讀取照片中溶液的RGB值，代入工作曲線中即可得到血清中堿性磷酸酶的活力值。