[發(fā)明專利]一種基于NH2

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201811437345.8
• 申請日: 2018-11-28
• 公開（公告）號: CN109557060B
• 公開（公告）日: 2020-10-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 林天然;秦雨欣;李金瑩;覃思媛;黃媛林;侯麗
• 申請（專利權(quán)）人: 廣西師范大學(xué)
• 主分類號: G01N21/64
• 分類號: G01N21/64
• 代理公司: 桂林市華杰專利商標(biāo)事務(wù)所有限責(zé)任公司 45112
• 代理人: 楊雪梅

本發(fā)明公開了一種基于NH₂?Cu?MOF的可視化檢測血清中堿性磷酸酶活性的方法，先合成NH₂?Cu?MOF納米酶材料；再利用NH₂?Cu?MOF納米酶和瓊脂糖制備檢測堿性磷酸酶活性的凝膠檢測管；最后將堿性磷酸酶加到凝膠檢測管后，將凝膠檢測管置于紫外燈下，通過觀察顏色變化實(shí)現(xiàn)半定量檢測；然后用手機(jī)或數(shù)碼相機(jī)拍照，通過RGB顏色提取器軟件，讀取測定照片中RGB值，分析RGB值來指示OPD的氧化程度，從而實(shí)現(xiàn)對血清中堿性磷酸酶活性的現(xiàn)場可視化多色熒光定量檢測；檢測時(shí)，先繪制凝膠顏色隨堿性磷酸酶活力大小變化的工作曲線，再對血清實(shí)際樣進(jìn)行檢測。該方法不需要昂貴的儀器和設(shè)備，不需要生物酶的參與，無需專業(yè)人員操作即可實(shí)現(xiàn)對血清中堿性磷酸酶的現(xiàn)場可視化多色熒光測定。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及檢測堿性磷酸酶活性的方法，具體是一種基于NH₂-Cu-MOF的可視化檢測血清中堿性磷酸酶活性的方法。

背景技術(shù)

堿性磷酸酶(ALP)是原核生物和真核生物細(xì)胞中普遍存在的一種水解酶，催化磷酸基團(tuán)從含有磷酸酯的多磷酸底物上移除。在人類的身體中，堿性磷酸酶廣泛存在于組織(例如骨，腎，肝等)中，在細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞分裂、分化、骨骼鈣化等多種正常細(xì)胞功能中起著重要的作用。另一方面，堿性磷酸酶活性的下調(diào)與多種人類疾病密切相關(guān)，包括低磷酸酯酶癥，原發(fā)性膽汁性肝硬化，糖尿病以及各種癌癥等。因此，開發(fā)可靠簡便地檢測堿性磷酸酶活性的方法對于臨床疾病的診斷和堿性磷酸酶在生理和病理過程中作用的研究具有重要的研究價(jià)值。

在目前已經(jīng)公開檢測堿性磷酸酶的相關(guān)專利中，CN108375616A一種檢測堿性磷酸酶的液晶生物傳感器及其制備方法，其液晶生物傳感器需要使用偏光顯微鏡獲得光學(xué)響應(yīng)圖像；CN106248644A一種基于碳點(diǎn)熒光“猝滅-恢復(fù)”的堿性磷酸酶的檢測方法，需要使用熒光光譜儀獲得熒光光譜圖；CN107422014A用于檢測堿性磷酸酶的修飾電極及制備方法與檢測方法，需要利用電化學(xué)工作站獲得電化學(xué)信號來繪制工作曲線。因此現(xiàn)有的堿性磷酸酶活性檢測方法主要借助熒光光譜儀、電化學(xué)工作站等分析儀器實(shí)現(xiàn)定量檢測。然而，這些方法對操作人員要求較高的專業(yè)技能，特別是所使用的儀器價(jià)格較為昂貴且體積龐大，不利于廣泛的應(yīng)用和推廣。

此外，現(xiàn)有的可視化檢測堿性磷酸酶活性的方法，CN106066325A一種檢測堿性磷酸酶的方法，利用反應(yīng)液顏色隨堿性磷酸酶濃度增加而從藍(lán)色變成無色的梯度顏色變化來實(shí)現(xiàn)堿性磷酸酶活性定量測定，然而，這種方法的缺點(diǎn)是濃度梯度顯色變化單一、分辨率低；還有CN106596532A一種簡單低成本的堿性磷酸酶活性的檢測方法也存在同樣問題。已有專利 CN106596532A一種簡單低成本的堿性磷酸酶活性的檢測方法采用親水性紙張?jiān)O(shè)計(jì)紙裝置，利用紙裝置中檢測試劑溶液的流動(dòng)長度反比于樣本中堿性磷酸酶的活性大小。然而該裝置需要用到生物酶如糖化酶，而生物酶在生產(chǎn)、運(yùn)輸以及使用的過程中，其活性的影響因素較多，而且僅靠直尺測量、人工讀取溶液的流動(dòng)長度，在精確度和準(zhǔn)確度上還有待提升；CN107677804A一種骨源性堿性磷酸酶檢測試劑盒及其使用方法，骨源性堿性磷酸酶檢測試劑盒雖檢測時(shí)間短，但仍需全自動(dòng)生化分析儀來實(shí)現(xiàn)檢測。因此，研制用于血清中堿性磷酸酶的可視化、便攜式、顏色變化多元、高分辨率的檢測方法具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，而提供了一種基于NH₂-Cu-MOF的可視化檢測血清中堿性磷酸酶活性的方法，該方法不需要昂貴的儀器和設(shè)備，不需要生物酶的參與，無需專業(yè)人員操作即可通過溶液或凝膠管的熒光顏色變化判斷堿性磷酸酶的活力大小，可以實(shí)現(xiàn)對血清中堿性磷酸酶的現(xiàn)場可視化多色熒光測定。

實(shí)現(xiàn)本發(fā)明目的的技術(shù)方案是：

一種基于NH₂-Cu-MOF的可視化檢測血清中堿性磷酸酶活性的方法，包括如下步驟：

（1）合成具有一定形貌特征的NH₂-Cu-MOF納米酶材料；